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1、贵州兴义华西雨蛙的分子鉴定■农学论文贵州兴义华西雨蛙的分子鉴定熊荣川1,2,李明3,田应洲「李松「陈红1(1.六盘水师范学院生命科学系，贵州六盘水553001;2.7盘水市生物硏究所，贵州六盘水553001;3・六盘水市第二十中学，贵州六盘水553001)摘要：对采自贵州省兴义市的华西雨蛙(Hylagongshanensis)标本进行了线粒体16SrRNA基因扩增,并用双重单系法分析构建了华西雨蛙各种群的系统发育树。结果表明，该标本属华西雨蛙，群内部分化为兴义支系、云南曲靖支系和越南沙巴支系，而3个支系间相互聚类关系有待进一步深入研究。关键词：华西雨蛙(Hyla
2、gongshanensis);16SrRNA基因；克隆；分子鉴走中图分类号:Q78文献标识码:A文章编号：0439・8114(2015)19・4865-03D01:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.19.055MolecularIdentificationofHylagongshanensisofXinyiCityinGuizhouProvinceXIONGRong・chuan：L,2,LIMing3zTIANYing-zhoul,LISonglzCHENHong1(1.DepartmentofLifeScience,Liupa
3、nshuiNormalUniversity,Liupanshui553001,Guizhou,China;2.LiupanshuiInsitituteofBiology,LiupanshuiNorma1University,Liupanshui553001,GuizhouzChina;3.TheTwentiethMiddleSchoo1inLiupanshuizLiupanshui55300「Guizhou,China)Abstract:Themitochondrial16SrRNAoftwoHy1agongshanensissamplesfromXinyicit
4、yinGuizhouprovincewasamplifiedandsequeneed,thephy1ogenetictreesofvariousgroupsofH.gongshanensiswasconstructedusingdoublemonophyleticanalyse.Theresultsshowedthatthisspecimenwasbe1ongedtoH.gongshanensis.H.gongshanensisrecovered3lineages^includingtheXinyilineage,theQuqinglineageandtheSab
5、ah(VietNam)lineage,buttherelationshipamongthethree1ineageswasstillunresolved.Keywords:Hy1agongshanensis;16SRNAgene;cloning;mo1ecu1aridentification收稿日期:2015・02・12基金项目：贵州省科学技术基金项目（黔科合J字LKLS[2013]06号）；国家自然科学基金项目（31360512）作者简介：熊荣川（1981・），男，贵州六盘水人，讲师，从事动物系统与进化方面硏究，（电话）18885469527（电子信箱）xion
6、grongchuan@126.com;通信作者,田应洲（1954・），男，贵州石阡人，教授，从事动物分类学研究,（电子信箱）t.y.zhou@163.com0华西雨蛙（Hylagongshanensis）隶属于雨蛙科（Hy1idae）雨蛙属（Hyla），广泛分布于中国四川、云南、贵州、湖南、广西、广东等地及印度和缅甸[11各地方种群间存在一定的形态差异，进一步将其分成5个亚种[2,3],即指名亚种、川西亚种、景东亚种、腾冲亚种和武陵亚种。贵州省境内主要分布有景东亚种和武陵亚种两个亚种”景东亚种主要分布于贵州省西部，武陵亚种主要分布于贵州省东北部。近年来,由于人为的
7、农田耕作环境的改变以及农药化肥的大量使用，种群数量大量减少，需要加强保护。本硏究利用华西雨蛙线粒体16SrRNA与其他华西雨蛙亚种同源基因进行相似性比较并构建系统发育树，对华西雨蛙各地方种群间的系统发育关系进行初步探讨。1材料与方法华西雨蛙标本于2014年6月23〜25日采自贵州省兴义市下五屯镇，2个成体（标本号：LPSXY2014062308;LPSXY2014062501）,保存于六盘水师范学院生命科学系标本馆。1・2目的基因片段的扩增和序列测定DNA模板的提取方法参照熊荣川等[4]的方法，扩增引物为1对两栖动物通用的线粒体16SrRNA片段扩增引物P7/P8
8、[5]zP
