松茸菌丝体液体培养方式及其最适培养基的筛选.pdf

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1、江苏农业科学2014年第42卷第8期．——245．——张丽，郭成金．松茸菌丝体液体培养方式及其最适培养基的筛选[J]．江苏农业科学，2014，42(8)：245—247松茸菌丝体液体培养方式及其最适培养基的筛选张丽，郭成金(天津师范大学生命科学学院／天津市动植物抗性重点实验室，天津300387)摘要：首次通过对松茸菌丝体的液体培养方式的比较，选择以间歇性手摇的方式进行筛选，以松茸菌丝体生物量(干质量)为主要指标，首先采用单因素试验分别筛选出2种最适碳氮源，再结合(3)正交设计方法，最终得到最适液体培养基配方：蔗糖30．0og／，L，麦芽糖20．00g／L，酵母粉2．5

2、0g／L，麦麸25．oog／L(浸提液)，KH2PO2．50g／L，MgSO·7HO1．50g／L，维生素B8mg／L，pH值自然条件。25℃静置培养12h，再每隔12h水平往复手摇约5min，培养72h，其生物量可达1O．92g／L。与前人试验结果相比，该方式周期更短，生物量更高。关键词：松茸；间歇性手摇；菌丝体；生物量；液体培养基；正交设计；周期。中图分类号：$646．150．43文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)08一o245—03松茸[Tricholomamatsutake(S．Ito＆S．Imai)Singer]别1．2培养基称松口蘑，属

3、担子菌门伞菌亚门伞菌纲伞菌亚纲伞菌目口蘑1．2．1综合培养基棉籽皮200．00g／L(浸提液)、马铃薯科13蘑属J，是一种珍稀濒危的食药用真菌，国家级二级保200．00g／L(浸提液)、葡萄糖20．00g／L、KH：PO3．00g／L、护植物，有极高的营养价值和经济价值。松茸是共生菌，MgSO4·7H2O1．50g／L、维生素B10．004g／L、琼脂18．0og／L，世界范围内研究松茸人工栽培已有几十年的历史，然而至今pH值自然条件。仍无突破性的成果。目前，随着松茸生理生态研究的深入，松1．2．2碳源初选培养基酵母粉3．00g／L，KI-~PO,3．00s／L，茸菌

4、丝的纯培养及子实体的仿生态栽培已取得了一定的进MgSO·7H2O1．50s／L，维生素B10．OO4g／L，pH值自然条展，但仅能做到接种式的半人工栽培，真正的人工栽培还没有件。分别以葡萄糖2O．00g／L、麦芽糖2O．00g／L、蔗糖实现-4]。目前，很多国内外学者采用高新技术从分子生物20．00g／L、马铃薯200．00g／L(浸提液)、玉米20．00g／L(浸学角度研究松茸外生菌根的形成机理、分子特性和它们的遗提液)为供试碳源。传特征序列J，以此作为分子标记，既可研究松茸的起源和1．2．3氮源初选培养基葡萄糖20．00g／，L，KH：PO亲缘关系，又可为建立松茸

5、基因库打下基础，以备将来用以挽3．00s／L，MgSO4·7H2O1．50s／L，维生素B14mg／L，pH值救其可能灭绝的命运。自日本学者洪田捻(1947)、广江勇自然。分别以酵母粉3．00g／L、蛋白胨3．00s／L、牛肉膏(1957)和小川真(1987)等先后报道了分离培养松茸菌丝体3．0og／L、硝酸铵3．00g／L、麦麸20．o0L(浸提液)为供试的方法、培养基、菌落形态和菌丝类型并为松茸菌种分离氮源。提供了成功的经验以来，人们采用不同的方法从不同的角度1．3试剂与仪器设备对松茸菌丝体纯培养。、液体发酵。等进行了许多研SW—CJ一2FD双人单面净化工作台(江

6、苏苏州净化设备究，通过对松茸菌丝体的获得、扩繁及其鉴定证实了在合理控有限公司)；yxQGo2手提式压力蒸汽消毒器(山东新华医疗器制试验条件下可以进行松茸菌丝体液体扩繁，且扩繁后的菌械厂)；WDP型微生物多用培养箱(广东省医疗器械厂)；丝体与原种依然保持种质的一致性。笔者运用不同于前BS224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统股份有限公人的试验设计，通过碳氮源单因素试验，并结合(3)正交司)；AP一01D真空泵(天津奥特塞恩斯仪器有限公司)；DHG一设计对松茸菌丝体最适液体培养基进行了系统的筛选，为松9240电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)。茸液体发酵及

7、今后的育种等提供了理论依据及技术支持。1．4试验方法1．4．1菌种活化与提纯复壮将保存的松茸菌种提前3d1材料与方法活化，在无菌条件下接种于斜面综合培养基上，25℃培养1．1供试茵种5d，再挑取健壮的菌丝前端，接种于平板综合培养基上，于松茸，由北京北纳创联生物技术研究院提供，编号25℃培养6d，备用。为ACC51071。1．4．2菌丝体液体培养用打孔器在生长健壮的菌丝体前端，挑取大小相同约0．5crIl2的菌块，接种于液体培养基中，每瓶5块。25℃静置培养12h，再每隔12h水平往复手摇约收稿日期：2013—12—045min，培养72h，每个水平3