[精品]松茸T2菌株培养基碳氮源的选择及优化.doc

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1、松茸T2菌株培养基碳氮源的选择及优化松茸［Tricholomamatsutake（ItoetImai）Sing］又名松草、松口蘑、合菌、台菌、木鲁枯（纳西族）等，屈于扒了菌纲、伞菌目、口蘑科、口蘑属是一种具有极高经济价值且与松属植物共生的外生菌根菌，生态习性十分特殊，迄今不能完全进行人工栽培。松茸菌丝在实验室的条件下生长缓慢，在固体培养基上的生长速度一般为1cm/月，对菌丝的营养生理进行研究以促进其生长一直是研究的热点。木文对松茸T2菌株进行了研究，先采用单因索试验筛选最佳的碳源,再选取战佳的氮源，应用三因素二次冋归正交旋转设计试验

2、得出最佳的培养基配方。1材料与方法1.1供试菌株松茸T2菌株来源:屮国农业大学生物学院陈强老师提供。1.2培养基合成培养基［5］,PDA+015%的酵母浸膏。1.3供试碳源、氮源供试碳源:葡萄糖、果糖、麦芽糖、（4）蔗糖、（5）纤维二糖、（6）a-?L糖、（7）D•半乳糖、⑻棉子糖、（9河溶性淀粉、（10）纤维素微晶、（11）果胶、（⑵海藻糖、（⑶甘露醇、（⑷丁二酸、（⑸环糊精、（16）L-谷氨酸、（17）L・精氨酸、（18）乙醇、（⑼柠檬酸、（20）木糖、（21）反丁烯二酸、（22）大豆粉、（23）玉米粉、（24）甘油、（25）燕

3、麦粉。供试氮源:（NH4）2SO4>（NH4）2HPO4>酒石酸钱、KNO3、酵母浸膏、蛋白脉、干酪素、牛肉浸膏、柠檬酸铁钱、柠檬酸钱、NHQ、（NH4）H2PO4^酵母粉、耿蛋刨东、硫酸铁钱、L■谷氨酸、L■精氨酸、脯氨酸、甘氨酸、NH4NO3、尿素、NnNO?、钮酸彼、草酸钱、苯丙酸钱、酪氨酸。以合成培养基为基础，分别以供试碳源、氮源代替培养基屮的葡萄糖、酒石酸锐用ImoLGLHCl或10%的KOH调节pH值为5.5左右。115°C灭菌30min（尿素采用细菌过滤器过滤除菌）后倒入育径7cm的平板屮，每个平板lOmLo1.4接种

4、培养及生长量的测定取在PDA+0.5%酵母浸膏培养基平板上生长60d的松茸菌落,用内径0.8cm的打孔器在菌落边缘打孔，将取下的菌丝块接入碳氮源培养基平板屮央，每个处理设4个重复。22°C培养30d,测量平板上菌落在“米”字形4个方向上的直径，取平均值。1.5培养基的优化根据食用菌的营养需求和碳氮源试验的结果，采川二因素二次冋归正交旋转设计试验得出最佳的培养基配比，输入变量X】（玉米粉）,X2（葡萄糖）,X?（酵母浸膏），输出变量Y（菌落真径）。接种、培养测量方法与1.4相同，采用40LI龄的菌种。按表1进行试验,数据统计采用SAS

5、软件（SAS软件公司,9.0版）。表1因素水平编码表编码值实际值X】（土米粉）/%X2（葡萄糖）/%X3（酵母浸膏）/%1.6828.002.001.0016.781.700.8205.001.250.55■13.220.800.28-1.6822.000.500.101.6验证试验根据冋归模型得出的最佳培养基组合，配制培养基，接种、培养测量方法与1.4相同，采用40口龄的菌种,同时与菌丝在PDA+0.5%的酵母浸膏培养基上生长为对照。2结果与讨论2.1碳源试验结果在碳源试验中，除L・精氨酸、乙醉、柠檬酸、反丁烯二酸和纤维素微晶外,

6、T?菌丝对其余供试碳源都有不同程度的利用，在环糊精和果胶为碳源的培养基上菌丝扩散较快,但十分纤弱疏松。以可溶性淀粉和棉了糖为碳源的培养基上,T?的菌丝生长最好，致密，无皱褶，菌落頁径到达1.70cm以上。其次为葡萄糖、D■半乳糖、蔗糖、麦芽糖和果糖等。杨民和等的研究表明,葡萄糖、果糖和甘露糖等单糖对松茸菌丝生长效果好。陈羽等对2株来源不同的松茸菌丝进行了研究，结果表明1株利用单糖生长好，另1株则利用淀粉生长好。本研究表明T?菌株利用淀粉最好，与AkiraOhta的报道相同。从总体上看，松茸对碳源的利用较为广泛,单糖、双糖、多糖、糖醇

7、都能利用。由于T2的菌丝对可溶性淀粉利用最好，所以又选取了含淀粉丰富的原料玉米粉、燕麦粉和大豆粉为碳源进行试验,以筛选出廉价的碳源，结果如表2。表2不同碳源对T2菌丝生长的影响种类平均菌落直径/cm显著水平（SSR法）0.050.01玉米粉2」9aA燕麦粉1.97bB葡萄糖1.60cC大豆粉1.57dD由表2可知，在a=0.05水平下，玉氷粉显著优于其他碳源，匍萄糖与大豆粉均数间差异不显著，其余均数间并界显著;在0.01水平下，玉米粉与燕麦粉作为碳源极显著优于其他碳源，而玉米粉与燕麦粉作为碳源间差异不显著，其余均数间差异显著。由此可

8、见，在试验研究范囤内，玉米粉为T?菌丝生长的最好的碳源。以F；•的培养基优化试验屮，考虑到玉米淀粉（降解后利用）为多糖，同时选用了利用效果较好的（真接利用）匍萄糖作为复合碳源。2.2氮源试验结果氮源试验结果表明,T?菌丝生长最好的氮源