在线固相萃取-高效液相色谱联用测定动物源食品中的维生素A、E.pdf

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1、第42卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第9期2014年9月ChineseJournalofAn~yticalChemistry1343～1347DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．140445在线固相萃取．高效液相色谱联用测定动物源食品中的维生素A、E谢云峰王浩刘佟任丹丹杨永坛(中粮营养健康研究院，营养健康与食品安全北京市重点实验室，北京102209)摘要采用固相萃取与双梯度高效液相色谱联用技术，建立了一种在线固相萃取一高效液相色谱同时测定动物源食品中维生素A、E的分析方法。样品于8O℃下皂化反应30min，经离心沉淀后引入一维c固

2、相萃取柱，采用60％(V／V)甲醇溶液对目标物进行在线富集净化，然后通过阀切换将其转移至二维液相分析系统进行分离检测。考察了萃取填料、上样溶剂及洗脱条件对猪肝、鸡蛋和配方乳粉的维生素A、E富集和基质净化效果。结果表明，在优化条件下，方法线性范围为0．02～20mg／L，线性相关系数R30．9998，对维生素A、E的检出限(S／N=3)为3．0—30．0g／L，实际样品加标回收率为87．3％～115．0％，相对标准偏差(RSD)为1．8％4．6％。本方法操作简便，灵敏度高，可用于动物源食品中维生素A、E的快速测定。关键词在线固相萃取；双梯度高效液相色谱；动物源食品；维生

3、素A；维生素E1引言维生素A和维生素E是机体维持正常生理功能和物质能量代谢必需的微量营养成分，但是它们在体内不能合成或合成量不足以满足身体需要，必须通过食物进行补充]。肝脏、蛋类和乳品等动物源食品含有丰富的维生素A、E，是人体所需脂溶性维生素的重要来源。由于脂溶性维生素化学性质不稳定，易受光照、空气和温度影响导致氧化分解_2]，而且动物源食品蛋白脂肪含量高，干扰因素多，高效提取和测定复杂基质食品中维生素A、E仍然是维生素分析技术的难点_3．4]。目前，维生素A和维生素E的分析方法主要有层析法E、比色法[、荧光法[、电化学法[、气相色谱法[]和高效液相色谱法[m]，其中

4、以高效液相色谱法最为常用。现行食品检验标准在内的大多数脂溶性维生素分析方法的样品前处理主要包括皂化、萃取、浓缩、净化等步骤[1l1]，涉及多次蒸发溶解，操作繁琐、费时，容易造成待测组分损失，导致测定结果偏低且重现性不好。近年来，前处理技术与色谱分离分析的在线联用为简化繁琐的手工前处理操作．提高复杂食品基质分析效率提供了新的技术手段H]。本研究利用双梯度液相色谱系统结合柱切换技术，建立了一种同时测定动物源食品中维生素A、E的在线固相萃取与高效液相色谱联用方法，具有分析效率高、溶剂消耗少、测定结果准确且重现性好等特点。与文献[15]相比，本方法不仅扩大了动物源食品检测种类

5、，而且缩短了分析时间，提高了检测灵敏度，为动物源食品中维生素A、E的测定提供了更为简便、灵敏、可靠的分析方法。2实验部分2．1仪器与试剂Ultimate3000双三元液相色谱系统(ThermoScientific公司)，配备双三元梯度泵、自动进样器、柱温箱含六通阀、二极管阵列检测器、变色龙色谱管理软件；Milli．Q超纯水机(Millipore公司)；台式高速冷冻离心机(ThermoScientific公司)。维生素A(视黄醇)、一维生素E、JB．维生素E、一维生素E和6一维生素E标准品(Sigma公司)；KOH、抗坏血酸(分析纯，国药集团北京化学试剂有限公司)；无水

6、乙醇、甲醇(色谱级，Fisher公司)；其它试剂均为分析纯；无水乙醇经脱醛处理后使用；猪肝、鸡蛋和婴幼儿配方乳粉购自本地超市。2014—05—26收稿；2014．07．21接受本文系中粮集团有限公司年度科技计划资助项目(No．2013一C2·F001)E—mail：yangongan@coco．com分析化学第42卷2．2色谱条件分析柱：ZorbaxExtend—C】8(150mm×4．6mm，5Ixm)；固相萃取柱：ZorbaxSB—C8(12．5mmX4．6mm，5m)；进样量：100txL；柱温：30℃；在线净化流动相：甲醇．水溶液(60：40，)，洗脱条件：使

7、用pH7．5甲醇．水溶液，以1mL／min流速上样并清洗萃取小柱5min，再使用pH3．5甲醇一水溶液清洗萃取小柱5min，分析测定。流动相：甲醇．水溶液(98：2，)，流速：1．7mL／min；紫外检测波长设为325和300nm。2．3标准溶液配制准确称取维生素A标准品10．0mg，一维生素E．维生素E、y．维生素E和．维生素E各50．0mg，用脱醛乙醇溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，配制成浓度分别为100mg／L维生素A和500mg／LOt，，和6维生素E标准储备液，于一2O℃保存。测定前用紫外分光光度法标定标准储备液准确浓度，再用脱醛乙醇稀