量子点标记免疫层析技术检测血液中的降钙素原.pdf

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1、第42卷分析化学(FENXII-IUAXUE)研究报告第11期2014年11月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1592～1597DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．140453量子点标记免疫层析技术检测血液中的降钙素原余皓徐良漆晓萍(深圳职业技术学院，医疗电子专业，深圳518055)(深圳市药品检验所，深圳518057)(深圳市南山区人民医院，深圳518052)摘要为了快速定量检测血液中降钙素原(Procalcitonin，PCT)含量，首先制备CdSe／ZnS量子点，再将量子点标记抗抗钙素单抗，标记单抗后量子点

2、荧光发射峰从620nm红移至625am，峰形保持良好。以制作的量子点标记免疫层析试纸条及其相应荧光测定系统。因减少单抗用量可降低试纸条成本，本研究采用结合垫上喷涂适量量子点，标记单抗并仅有检测线的结构。通过检测信噪比，优化此试纸条的参数。本研究的量子点荧光标记试纸条及其配套测定系统可在20min内快速检测PCT，定量检测线性范围0．2～100g／L，灵敏度达到0．1L。22份血液样本检测结果与目前商品设备检测结果的Pearson相关系数为0．9995，K—S检验的Sig为1．0，说明两种检测方法的一致性。快速定量检测PCT具有定量测量细菌性感染、临床指导抗生素合理应用的重要

3、意义。关键词量子点；免疫层析；降钙素原；血液；试纸条1引言降钙素原(Procalcitonin，PCT)是一种内源性非类固醇类抗炎物质，在细菌感染时诱导产生，细菌内毒素是诱导PCT产生的最主要刺激因子⋯。生理情况下，健康人的血液中PCT浓度小于0．2g／L，通常不会被检测到。细菌感染时，除甲状腺外，肝脏的巨噬细胞和单核细胞、肺和肠道组织的淋巴细胞及内分泌细胞都能合成分泌PCT，此时血液中的PCT水平会明显升高，且随着感染进展或控制而持续升高或逐渐下降。PCT作为生物标志物检测细菌感染的参考提示包括：在正常人血液中PCT浓度

4、度为0．25～0．5g／L；可能存在感染或败血症，需要动态观察的病人血液中PCT含量为0．5～1．0g／L；存在系统的细菌感染，需要密切检测、必要时可给予特异抗感染治疗和支持治疗的病人的血液中PCT含量为1～100Ixg／L，甚至更多。与其它传统实验室指标，如白细胞计数、c．反应蛋白(CRP)水平相比，PCT对于诊断细菌感染性疾病具有更好的特异性。目前，检测PCT常见半定量法和定量法。半定量法多采用胶体金免疫层析法J，通过观察胶体金免疫层析试纸条上检测线的颜色深浅，可以将血清中PCT的含量分大致4个等级。定量法目前包括免疫荧光法J、免疫化学发光法7I副等。相比而言，免疫荧光

5、法、免疫化学发光法等能够定量检测PCT的含量，但是检测设备操作复杂且昂贵，检测费用高，耗时长。而胶体金免疫层析法检测方便、成本低，但灵敏度不高，制备重复性差。而且以上各种方法都只能检测血清中的PCT含量。近年，量子点由于具有激发波长范围宽、发射光谱谱峰狭窄且对称、受外界干扰小、稳定性好等受到广泛关注。基于以上特点，量子点标记免疫层析技术可以实现高灵敏度的快速定量检测，操作远比其它检测方法简单，而且其荧光检测设备比其它定量法设备便宜得多。因此，本研究采用量子点标记免疫层析技术定量检测人体血液中的PCT含量，具有一定实际应用价值。2014-05-27收稿；2014-08．18接

6、受本文系深圳市科技研发基金(No．JCYJ20l2O828091734059)和国家自然科学基金(N0．11404222)资助E-mail：qxp8179@21on．corn第11期余皓等：量子点标记免度层析技术检测血液中的降钙素原2实验部分2．1仪器与试剂Ls55荧光分光光度计购于美国Perkin—Elmer公司，XYZ3000点膜仪购于美国Bio—dot公司。CdO、硒粉(se)、硫粉(s)、油酸、锌粉(zn)、十八烯(ODE)、十八胺(ODA)、三辛基氧化膦(TOPO)、牛血清白蛋白(BSA)、叠氮化钠购于美国Sigma—Aldrich公司；巯基乙酸(MAA)、三氯甲

7、烷、正己烷、甲醇、丙酮、庚烷、甘氨酸、四硼酸钠、蔗糖等购于中国医药集团，试剂均为分析纯；N．羟基琥珀酰亚胺(NHS)、碳化二亚胺(EDC)购于上海化学试剂公司；抗抗钙素单克隆抗体和抗降钙素多克隆抗体购于芬兰Hytest公司；硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜购于Millipore公司；全血分离膜购于上海杰一公司生物技术有限公司；黏性底板购于上海良信科技有限公司。实验所用水均为Milli．Q超纯水。2．2量子点标记单抗的制备油溶性CdSe／ZnS量子点的制备方法参见参照文献。将油溶性CdSe／ZnS量子点水溶性化方法：用丙酮