小叶锦鸡儿内生拮抗菌株的筛选与分子鉴定.pdf

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1、江苏农业科学2014年第42卷第6期-．——105．——李志英，田岳娟，徐惠娟，等．小叶锦鸡儿内生拮抗菌株的筛选与分子鉴定[J]．江苏农业科学，2014，42(6)：105—107小叶锦鸡儿内生拮抗菌株的筛选与分子鉴定李志英，田岳娟，徐惠娟，代金霞(宁夏大学生命科学学院，宁夏银川750012)摘要：采用抑菌圈法对分离自宁夏荒漠草原固沙植物小叶锦鸡儿的27株内生细菌进行植物病原菌抑制能力的测定。结果表明，小叶锦鸡儿内生细菌的抑菌能力较强，多数菌株对2种以上的病原菌表现出拮抗活性，且不同菌株之间以及同一菌株对不同病原菌间的拮抗活性存在很大差异，有7株内生细菌对所有供试病原菌都表现出一定的抑制活

2、性。通过16SrDNA序列分析发现，小叶锦鸡儿内生拮抗菌株分别与芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属、假单胞菌属、罗尔斯通氏菌属、中华根瘤菌属具有很高的同源性，这些菌株多数为芽孢杆菌。关键词：小叶锦鸡儿；内生菌；抑菌活性；分子鉴定中图分类号：Q939．92文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)06—0105—02植物内生菌(endophyte)是指生长在健康植物组织、器官1材料与方法内部，而又不引发宿主植物表现出明显感染症状的微生物类群⋯。植物内生菌长期生存于植物体内的特殊环境中并与1．1供试菌株宿主协同进化，一方面植物体为其提供生长所必需的能量和供试菌株分离自宁夏荒漠固沙植物小叶锦鸡

3、儿的各部分营养，另一方面，内生菌又可以通过自身的代谢产物或借助于组织中，根据培养形态选取其中的27株进行抑菌试验，菌种信号传导作用对植物体产生影响。许多植物内生细菌具编号分别为：、Ro9、RIo、Rl2、RRR4I、R43、R“、R46、R47、有多方面的生物学和生态学功能，如固氮、促进植物生长、抗R48、Lo1、k、、L1o、L12、L13、L15、Ll6、L17、L18、Ll9、L20、S0l、S03、逆境、抗病虫害和生物修复等。sD3。指示病原菌为：小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、植物病害是引起植物品质下降、产量损失的主要原因之番茄枯萎病菌(Fusariumo

4、xysporumf．sp．1ycopersici)、番茄炭一，约80％的植物病害是由植物病原菌引起的。El前，对植疽病菌(Colletotrichumlycopersici)、玉米大斑病菌(Setosphaeria物病害的主要防治手段是采用化学农药，而化学农药对人畜turcica)、马铃薯干腐病菌(Fusariumsolani)、萝卜黑斑病菌的副作用以及残留问题、环境污染问题已经成为农业生产中(Alternariasp．)，均来源于宁夏大学农学院植物病理室。亟需解决的主要问题。植物内生菌能产生众多的抗菌产物并1．2内生茵的分离与纯化在一定条件下成为植物病原菌的拮抗菌，却不会引起宿主植各称取

5、1g小叶锦鸡儿的根、茎、叶，表面消毒后置于灭物明显的病症，目前从植物体内筛选对植物病原菌具有抑制菌研钵中研磨；将磨碎的组织加到含有灭菌生理盐水和灭菌作用的拮抗内生菌并进行生物防治已经成为研究热点。玻璃珠的锥形瓶中，涡旋振荡1min；将上清液倒入灭菌离心小叶锦鸡儿(CaraganamicrophyliaLam．)为豆科蝶形花管中沉淀后，再将上清液进行梯度稀释，稀释率分别为10～、亚科锦鸡儿属植物，具有广泛的适应性和极强的抗逆性，是中10～、l0。。，各取0．1mL涂LB平板，每个处理重复3次；同时国西北、华北、东北西部水土保持和固沙造林的重要树种之取0．1mL最后一次冲洗的无菌水涂平板，作为

6、表面灭菌对一。小叶锦鸡儿在维护干旱荒漠区的生态平衡、改善沙区环照。将所有平板于28℃培养72h，挑取平板上的单菌落进境、发展畜牧业生产、提高沙区的经济效能中发挥着十分重要行划线分离，直至得到纯的单菌落并保存在斜面上备用。的作用]。1．3抑茵能力的测定本试验通过对小叶锦鸡儿内生细菌抑制植物病原菌的能采用LB固体培养基抑菌圈法进行抑菌活性的测定。用力进行测定，试图筛选出具有较强抑菌活性的菌株并对其进接种环分别挑取纯化好的内生菌单菌落接入装有20mL液体行分子鉴定。研究结果不仅可为开发生物农药提供菌种资发酵培养基的锥形瓶中，于28℃、150r／rain恒温振荡培养源，同时也将为丰富我国的微生物资

7、源、推动干旱地区微生物48h，取出后用无菌水调至D值一致。将指示病原菌接入资源的保护、开发和利用提供理论依据。PDA液体培养基中，在28℃、100r／rain条件下恒温振荡培养48h，无菌过滤后取上清备用。采用对峙培养法，取200L指示病原菌滤液并用无菌玻收稿日期：2013—09～04璃棒均匀涂布于LB固体培养基上，干燥后用灭菌打孔器对基金项目：国家自然科学基金(编号：31200103)；宁夏自然科学基金称打4个孔，取3