杜仲内生真菌的分离与拮抗菌株的筛选

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5、eofMasterofMedicineByYanXingMinSupervisor:Prof.LiQin,AssociateProf.YuanWangJunJune,2015摘要杜仲（EucommiaulmoidesOliv.）为杜仲科杜仲属落叶乔木，中国特有经济树种，国家二级保护植物。其次生代谢产物如绿原酸、桃叶珊瑚甙、京尼平甙等具有抗菌、抗肿瘤等药理活性。植物内生菌普遍存在于各种植物中，许多内生菌能产生与宿主植物相同或相似的代谢产物，且许多是未发现过的新物质。利用内生菌筛选生物活性成分或先导

6、化合物成为寻找天然药物的又一条重要途径，并且许多化合物对动植物致病菌有明显的抑制作用，因此在医药领域和农药领域，植物内生菌是目前研究的热点。同一种植物生长在不同的环境，其内生菌的多样性及生物活性都有所不同。目前，杜仲内生真菌研究主要集中于陕西、四川、上海等地，更重要的是缺乏对分离内生真菌活性成分的研究。河南省开封市紧临黄河，位于华中与华北地区分界点，其独特的地理位置及气候条件为研究筛选植物内生菌提供了独一无二的天然资源。本研究采用组织分离法从生长于河南大学药用植物园的杜仲叶和果实分离内生真菌，通

7、过观察菌落性状、大小、颜色筛选。培养液用高效液相色谱法（HPLC）检测培养液中是否含有绿原酸、桃叶珊瑚苷等杜仲的主要活性成分。对峙培养评价每个菌株的抗菌活性。对于对峙法有抗菌活性的菌株，用生长速率法评价抗菌活性。对于抑菌效果好的内生真菌，测定ITS片段，Blast比对鉴定其种类。希望能从中分离到具有良好抑菌效果的内生真菌，为进一步提取优良生物活性和新颖化学结构的内生真菌代谢产物打下基础。结果如下：1.菌种分离用1/4划线法对长出的杜仲内生菌进行分离纯化，用形态观察法和显微检测法对杜仲内生菌菌丝和

8、孢子进行检测分类，结果显示：一共分出91株形态不同的菌株。2.杜仲内生菌次级代谢产物化学成分测定7个菌株能够产生桃叶珊瑚苷；2个菌株能够产生绿原酸；没有菌株能够产生黄酮。3.杜仲内生菌抑菌实验分别采用对峙法和菌丝生长速率法对杜仲内生菌进行抑菌活性的检测，供试菌禾谷丝核菌（Rhizoctoniacerealis），小麦根腐（DrechsleraSofokiniana），小麦赤霉病禾谷镰孢（Fusariumgraminearum），蜡I样芽孢杆菌（Bacilluscereus）；人类致病菌有：金黄色