杜仲内生真菌的分离及其鉴定.doc

《杜仲内生真菌的分离及其鉴定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、杜仲内生真菌的分离及其鉴定　　摘要：从杜仲的根、茎、叶中分离得到８０株内生真菌，经显微形态特征观察鉴定为１４个属，其中根部３３株涉及１０个属，茎部２６株涉及９个属，叶部２１株涉及６个属。结果表明，杜仲的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异。　　关键词：内生真菌；分离；鉴定；杜仲　　中图分类号：Ｑ９３－３３，Ｓ５６７．１＋９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11404－0731-03　　　　ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄIｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆEｎｄｏｐｈｙｔｉｃFｕｎｇｉｆｒｏｍＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉ

2、ｄｅｓ　　　　ＳＵＮＫｕｉ１，ＳＵＹｉｎ－ｑｕａｎ２　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｉｇｈｔｙｓｔｒａｉｎｓｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉａｔｔｒｉｂｕｔｅｄｔｏ１４ｇｅｎｕｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｓ，ｓｔｅｍｓａｎｄｌｅａｖｅｓｏｆＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓOliv.．Ａｍｏｎｇｔｈｅｍ，３３ｓｔｒａｉｎｓｏｆ１０ｇｅｎｅｒａｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｒｏｏｔｓ，２６ｓｔｒａｉｎｓｏｆ９ｇｅｎｅｒａｆｒｏｍｓｔｅｍｓ，

3、ａｎｄ２１ｓｔｒａｉｎｓｏｆ６ｇｅｎｅｒａｆｒｏｍｌｅａｖｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｆａｃｔｓｔｈａｔｔｈｅｑｕａｎｔｉｔｙ，ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉｗｅｒｅｖａｒｉｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓｏｆＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄs：ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓOliv.　　　　杜仲是我国独有的杜仲科杜仲属中的单种

4、植物，具有降压、消炎、防癌抗癌等多种药用功效。杜仲全身是宝，经济价值极高［１］。近年来，杜仲研究、开发取得了突破性进展，更使其身价倍增。目前这一重要的药用植物在利用上一方面已出现野生资源匮乏、药材供应不足的问题，另一方面其产品开发与活性物质提取的研究又较活跃，故寻找类似的替代资源受到关注［２］。自发现了能够产生紫杉醇的内生真菌以来，植物内生真菌能够产生与宿主相同或相似的生物活性成分已逐步得到验证［３，４］。本研究对杜仲内生真菌的种类进行分离及鉴定，以期了解杜仲内生真菌的资源情况，进一步研究其生物多样性。　　１材料与

5、方法　　１．１材料　　分离所用材料为杜仲的根、茎、叶，采自西北农林科技大学林学院校园内，树龄约２０年，树体健壮，无病虫害。　　１．２培养基　　分离培养基为ＷＡ－抗生素培养基：琼脂２０ｇ，氨苄青霉素２００ｍｇ，链霉素２００ｍｇ，水１０００ｍＬ。　　纯化培养基为ＰＤＡ培养基：马铃薯２００ｇ，葡萄糖２０ｇ，琼脂２０ｇ，水１０００ｍＬ，ｐＨ值为７．０～７．２。　　1．3试验方法　　1．3．１杜仲内生真菌的分离取杜仲多年生根、茎，刮去外表皮后，剥下根皮、枝皮用无菌水冲洗干净，用剪刀剪成１ｃｍ×１ｃｍ的小块。在经过紫外线消毒的

6、接种间内，把剪好的材料置于７５％乙醇消毒１ｍｉｎ，而后用２．５％次氯酸钠消毒１０ｍｉｎ，再用７５％乙醇消毒１ｍｉｎ，无菌水冲洗２～３次，剪去边缘，接入已倒好的ＷＡ－抗生素平板培养基上，将培养皿置于２８℃培养箱中倒置培养３～７ｄ。叶片直接剪为０．５ｃｍ×０．５ｃｍ大小，做与根、茎相同的处理，并进行培养［５］。　　1．3．２杜仲内生真菌的纯化取切口处新长出的菌丝，及时转接至新鲜ＰＤＡ培养基上培养，待菌落出现后，根据菌落形态、颜色的差异以及长出时间的不同，分别挑取各平板上的菌落边缘的菌丝接于新的平板上进行分离培养。培养数

7、日后，观察菌落的形态及其菌落边缘的整齐情况，并做相应的记录。采用菌丝顶端纯化法逐步纯化，对菌株编号后，转至ＰＤＡ斜面培养基上，于２８℃培养箱中培养５～７ｄ，然后放入４℃冰箱保存［６，７］。　　1．3．３杜仲内生真菌菌株鉴定从纯化培养数日的菌落上挑取菌丝并连同分生孢子制成玻片，置于光学显微镜下观察菌丝形态、孢子梗形态、孢子形态以及孢子与营养体之间的着生关系，对照有关资料确定真菌的分类学地位［８，９］。　　２结果与分析　　２．１杜仲内生真菌的分离鉴定结果　　２．１．１菌株的分离鉴定从杜仲植物中分离获得８０株内生真菌，经

8、显微镜下形态观察，将８０株内生真菌分类鉴定为６目、８科、１４个属。其种群种类、数量、分布以及菌落特征和形态特征结果见表１、表２。从表１中可以看出，杜仲的内生真菌中，以链格孢属、镰孢霉属为优势种群，占总数的３５％，其中链格孢属最多，占２０％，其次是镰孢霉属，占１５％。　　２．１．２植物内生真菌在杜仲不同部位中的分布从表２和表３中可以看出，杜仲８０株内生真菌分布