黄瓜疫霉菌拮抗菌株的筛选、鉴定及拮抗物质的初步分析

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3、ｍｅｌｏｎｉｓａｎｄｒｅｌｉｍｉｎａｒｇｙｐｐｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｔｓＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＳｕｂｓｔａｎｃｅ研究生姓名孙莉指导教师易图永教授学科专业植物病理学研究方向植物病害生物防治论文答辩日期２０１５．０６．１０鐵綾龄鋪刘勇论文评阅人肖放华、梁满中、肖启明二—０五年五月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导教师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或

4、其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。。《ＬＯ／；ＯＳ年研究生签名：和４时间月＾日、关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ；学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并同意将由此产生的收益捐赠给学校教育基金会用于发展研究生教育。（保密的学位论文在解密后应

5、遵守此协议）０占研究生签名：抑冻时间；山月日）食年ｊｙ＾１广指导教师签名；时间：７年６月ク日摘要摘要黄瓜疫病（Ｃｕｃｕｍｂｅｒｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｂｌｉｇｈｔ）是黄瓜疫霉菌（Ｐ砂辟ｍｅ／ｏＨｉｓ）引起一的种对黄瓜影响较大的±传病害，严重影响了黄瓜的生长、产量及品质。目前化学防治效果不佳且存在生态安全问题。因此，筛选、利用有益微生物及其代谢产物来防治黄瓜疫病是实施绿色植保的有效措施。本研究将从±壤中分离到的细菌和放线菌与黄瓜疫霉菌进行对時培养，筛选到２株对黄瓜疫霉菌有明显括抗作用的生防菌株，对这２株茵株进行了培养性

6、状、生理生化和分子生物学鉴定，并对其中１株枯抗菌进行发酵优化和抑菌活性物质初步分析。主要研究和结果如下：（１）采用±壤稀释法，从采自湖南、北京等地的王壤样品中分离得到２６９株放线菌和细菌。Ｗ黄瓜疫霉菌为祀标菌，通过平板对時培养法，巧步筛选到７株对黄瓜疫霉菌有明显措抗作用的微生物菌株。经过发酵液稀释５倍后复筛，发现放线菌Ｘ５４菌株和细菌Ｐ３菌株对黄瓜疫霉菌菌丝生长的抑制率达到７０％Ｗ上。此外，放线菌Ｘ５４对辣椒炭痘病菌、烟草黑腔病菌、水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、相橘炭谊病菌、黄瓜枯萎病菌等都有一定的抑制作用。（２）通过对括抗茵株Ｘ５４

7、和Ｐ３的培养性状、生理生化特性进行研究，Ｗ及利用ＰＣ民技术从基因组ＤＮＡ中扩增１６ＳｒＲＮＡ序列，并结合生物信息学方法进行分化初步认为，放线菌Ｘ５４为弗吉尼亚链霉菌（化卿ｏ／ｎｙｃｗＶ咕其１６ＳｒＲＮＡ的登录号■化ＫＭ０７８９２６细菌Ｐ３为地衣芽抱杆菌（５化加＂５：沁《／７７？，ＳｒＲＮＡ的登录号；抑句其１６ＫＪ８７２５３８。（３）对枯抗菌Ｘ５４进行发醇条件优化，首先对培养基优化，确定其碳氮源的配方：麦芽糖２０．０ｇ／Ｌ、蛋白胳３．０ｇ／Ｌ。再对发酵条件进行单因素Ｗ及响应面试验，最终确定°对放线菌Ｘ５４的发酵条件为：种龄３７ｈ、温度２

8、８Ｃ、转速