聚乳酸聚乙醇酸微球冷冻切片方法的研究.pdf

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1、广东药学院学报JournalofGuangdongPharmaceuticalUniversityFeb．2014．30(1)聚乳酸聚乙醇酸微球冷冻切片方法的研究黎呐，麦海燕，罗宇燕，钟晨，张永明(1．中山大学药学院，广东广州510006；2．中山大学附属第三医院，广东广州510630)摘要：目的研究聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)微球切片的制备方法，以便使用扫描电镜获得孔洞结构完整清晰的微球截面图片，为后期使用图像处理软件计算微球的孔隙率提供基础。方法使用冷冻包埋剂包埋载有牛血清白蛋白(BSA)的PLGA微球，冷冻切片获得微球截面，并用扫描电子显微镜观

2、察切片形态，分别考察包埋剂的种类、浸泡时间、液氮冷冻等对切片质量的影响。结果优化方法为：将微球浸泡在自制的质量浓度10％明胶+5％甘油混合冷冻包埋剂中，于37cc浸泡3h，然后转移至质量浓度20％明胶+5％甘油混合冷冻包埋剂中，于37℃浸泡1h，再转移至一20℃的冰箱中使包埋剂凝固；切片前将包埋块浸入液氮中急速冷冻5min。结论使用优化方法所得的PLGA微球切片，截面孔}同结构完整清晰，且操作方法简单、快速和有效。关键词：聚乳酸聚乙醇酸：微球；微观结构；冷冻切片技术中图分类号：R944文献标志码：Adoi：10．3969／j．issn．1006—8

3、783．2014．01．001文章编号：1006—8783(2014)01．001．05Studyoncryo-sectioningtechniqueofpoly(1actic-CO-glycolicacid)microspheresIJlNa，MAIHaiyan，LUOYuyan，ZHONGChen，ZHANGYongming(1．SchoolofPharmaceuticalSciences，SunYat—senUniversity，Guangzhou510006，China；2．TheThirdAfiliatedHospitalofSunYat

4、—senUniversity，Guangzhou510630，China)Abstract：0bjectiveTodevelopanexperimentalmethodtoobtaincompletecryo—sections，whichshowthestructureofpoly(1actic—CO—glycolicacid)(PLGA)microspheresclearlywiththeinternalporesretainingtheirshape．MethodsThemicrospheresweresuspendedintwodiffere

5、ntembeddingagents，OCT(optimalcuttingtemperature)compoundandanaquasolutioncontaininggelatinandglycerin，andthefixedsampleswereembedded，frozeninliquidnitrogenandcryo—sectioned．Thenthesectionsweredriedandphotographedbyscanningelectronmicroscopy．Thetechnicalparametersofcryo—section

6、ingsuchasthetypeofembeddingagents，theimmersiontimeandtheprocedureofquickfreezingbeforecryo—sectioningwereinvestigated，andtheoptimizedmethodwasestablished．ResultsTheoptimizedcryo-sectioningmethodwasasfollows：microspheresweresoakedinanaqueoussolutioncontaining10％gelatin-5％glycer

7、infor3hat37oC．thensoakedin20％gelatin一5％glycerinfor1hat37oC，aftersolidificationbystoredin一20℃，themicrospherescontaininggelatin—glycerinjellywerefrozeninliquidnitrogenfor5minandcryo—sectioned．ConclusionsTheporousstructurewithoutdistortionofthesectionscouldbeclearlyobservedbyscan

8、ningelectronmicroscopy．Theoptimizedmethodwaseasy，fastandeffec