牛IL-6基因原核表达及其对口蹄疫病亚单位疫苗的佐剂效应研究.pdf

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1、中国摩学通报2014。30(20)：11—16ChineseAgriculturalScienceBulletin牛IL一因原核表达及其对口蹄疫病亚单位疫苗的佐剂效应研究张灿(青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109)摘要：为了研究荷斯坦奶牛白介素6(见．6)基因作为佐剂对vPl蛋白免疫效果的影响，分别克隆／L．基因和例基因，连接到栽体pGEX．6p．1中，构建重组质粒pGEX．6P．1／BoIL．6、pGEX．6P．1脚l、pGEX．6P．1／BOIL．6／VPI。重组质粒在大肠杆菌中高效表达。动物试验

2、检测IL．6作为分子佐剂对豚鼠免疫应答的影响。结果表明：构建的重组质粒在原核系统中正确表达，以包涵体形式存在。表达的融合蛋白三次免疫豚鼠后，检测发现IL6／VP1组能够诱导产生高水平的体液免疫反应和细胞免疫反应，与疫苗组及VPI+FCS组免疫效果相当。本实验证实IL．6作为分子佐剂能够提高VP1的免疫效果。关键词：口蹄疫病毒基因；牛白细胞介素6基因；表达；分子佐剂中图分类号：$855文献标志码：A论文编号：2013．3397ExpressionofBovine／L-．6andtheAdjuvantEfectso

3、nSubunitVaccineofFoot-and-MouthVirusZhangCan(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedwine,Qi,~oAgricultureUniversity，QingdaoShandong266109)Abstract：Todetecttheadjuvantefectsof／L一6onsubunitvaccineoffoot—and—mouthdisease，bovineL-6andsequences。wereclonedandinsert

4、edintotheexpressingvectorpGEX一6p一1respectively．RecombinedplasmidspGEX一6P一1／BOIL一6．pGEX一6P一1／VP1andpGEX一6P一1／BolL一6／VP1wereconstructedandexpressedinEcoliRS21withahighexpressionleve1．The／L一6efectsonimmuneresponseinguineapigasmoleculeadjuvantweredetected．Theres

5、ultsshowedrecombinedplasmidswereexpressedcorrectlyinEeo／iininclusionbody．AfterrecombinedproteinsimmunizedGuineapigsforthreetimes．IL-6／VP1groupinducedahighlevelofhumoralimmuneresponseandcellularimmuneresponse，whichhadasimilarimmuneleveltovaccinegroupandVP1+CS

6、Fgroup．Theresultsindicated／L一6couldenhancetheimmunologicalreactionlevelasmoleculeadjuvant．Keywords-"geneoffoot—and—mouthvirus；bovineInterleukin一6：expression；moleculeadjuvant0引言疫苗的制备[2】。细胞因子能够作用于体内免疫活性细口蹄疫(Foot．and．MouthDisease，FMD)是严重危胞，使其分化和增殖，对机体没有明显毒性作用，在

7、基害偶蹄动物的烈性人畜共患传染病，目前免疫预防是因工程疫苗中使用具有明显的佐剂效应，逐渐引起人主要手段1。口蹄疫灭活苗临床应用广泛，但是疫苗们的关注嘲。使用的佐剂主要是弗氏不完全佐剂和完全佐剂，存在细胞因子IL6具有多种生物学功能，能够作用于严重的副作用。VP1蛋白位于口蹄疫病毒颗粒表面，多种免疫细胞，在调节免疫应答、抗感染和造血功能等作为口蹄疫病毒主要抗原被广泛用于口蹄疫基因工程方面发挥重要作用，能够与IL．2、TNF．礴细胞因子相基金项目：青岛农业大学高层次人才科研基金“牛干扰素扭u的克隆与表达”(6305

8、16)；山东省自然科学基金“多价噬菌体Bp7尾丝蛋白gp37~gp38在宿主识别过程中的作用”(ZR2013CQ024)。作者简介：张灿，女，1976年出生，河北石家庄人，副教授，博士，研究方向：预防兽医学。通信地址：266109山东省青岛市青岛农业大学动物科技学院，Tel：0532-86080734，E-maihcleverllarne@163．tom。收稿日期：2013．12—30