O型口蹄疫病毒VP1基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2016，47(3)：472—477ISSN2095—119l：CODENNNXAABhttp：／／www．nfny】cb．conlDOI：10．39696：issn．2095-1191．2016．03．472O型口蹄疫病毒卯j基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定何奇松1，陈磊1，颜健华1，许瑞胜2，易春华3，韦达有，，冯淑萍-，黄胜斌1，梁晟1，熊毅P(1广西动物疫病预防控制中心，南宁530001；2崇左市动物疫病预防控制中心，广西崇左532200；3桂林市动物疫痛预防控制

2、中心，广西桂林541002)摘要：【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI基因及其多表位基因的重组蛋白，为建立。型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDVVPl全基因重组质粒pMDl8-T．T．Ⅵ，J及串联的VPl多表位基因重组质粒pMDl8一T—O—VPJ为模板，通过特异性引物扩增并回收目的基因，构建重组质粒pET．32a．V'P1和pGEX-6p．1．VPI，然后转入大肠杆菌BL21l(DE3)中诱导表达，并以SDS．PAGE和Westernblotting对融合蛋白进行分

3、析鉴定。I结果】0型FMDV的VPI基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到正确表达，表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在，纯度较高，且均能与猪抗0型FMDV阳性血清发生特异性结合，具有良好的反应原性。【结论】表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性，可作为包被抗原应用于。型FMDV抗体检测试剂盒研l发。关键词：O型FMDV；VPI基因；多表位基因；原核表达；纯化；鉴定中图分类号：$852．659．6文献标志码：A文章编号：2095—1191(2016)03—0472—06Prokaryoticpression．13urificati

4、onandidentificativroKaryoticexl3resslon13urilicationauidencatiOnOl⋯Vt—I。．nandmultiepitofoffoot-and-mouthgeneandmulti-epitopegenetOOoutlldiseasevirusserotypeOHEQi-son91，CHENLeil，YANJian-hual，XURui-shen92，YIChun-hua3，WEIDa-you3，FENGShu—pin91，HUANGSheng—binlLIANG⋯Shen91，XIONGYi

5、l+(1GuangxiCenterforAnimalDiseasePreventionandContml，Nanning530001-∥China；2ChongzuoCenterforAnimalDiseasePreventionandControl，Chongzuo，Guangxi532200，China；3Gi_iilinCenterforAnimalDiseasePreventionandControl，Guilin，Guangxi541002，China)Abstract“Objective】Thepresentexperimentwa

6、sconductedtoobtainrecombinantproteinscodedbyV纠geneandmulti—epitopegeneoffoot-and-mouthdiseasevirus(FMDV)serotypeObyprokaryoticexpressionandchromatographicpurification．jnordertoprovidedtechnicalsupporfsfordevelopingEIJSAdetectionkittodetectantibodytoFMDVserotype0andpreparingh

7、ighimmuneseIMmforanimals．【Method]UsingrecombinantplasmidpMDl8T-T一Ⅵ’Jcontain-ingfull-lengthVPlgeneofFMDVserotypeOandpMDl8T一0一’，PIcontainingVPlmulti—epitopegeneastemplates．thetargetgeneswereamplifiedwithspecificprimers，andthenrecycled，SOastoconstructexpressionplasmidsPET一32a-V

8、PlandpGEX一6p一1一VPJ．Then，therecombinantplasmidsweretransferedintoEscherichia