木薯细胞壁酸性转化酶MeCWINCV5基因启动子的克隆和序列分析.pdf

《木薯细胞壁酸性转化酶MeCWINCV5基因启动子的克隆和序列分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、安徽农业科学。JournalofAnhuiAgri．Sci．2014。42(11)：3179—3181，3215责任编辑石金友责任校对况玲玲／木薯细胞壁酸性转化酶MeCWINCV5基因启动子的克隆和序列分析夏文睿，，刘姣，胡艳平，，郭建春，，李瑞梅，段瑞军，符少萍(1．海南大学农学院，海南海口570228；2．中国热带农业科学院生物技术研究所，海南海口571101；3．农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室，海南海口571101)摘要[目的]了解MeCWINCV5在植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答中的功能。[方法]采用PCR方法从木薯基因组

2、中分离MeCWINCV5基因启动子序列，考察MeCW1NCV5对植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答的影响。[结果]分析显示启动子的长度为1170bp，舍有TATAbox和CAATbox等多个典型的真核生物启动子基本元件元件，还存在大量逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件，如HSE、MBS、SARE、GARE—motif和TATC—box等多个与植物逆境胁迫相关的元件。[结论]MeCWINCV5基因启动子与逆境胁迫有关，在木薯抵御逆境胁迫的生理过程中具有重要作用。关键词木薯；细胞壁酸性转化酶；启动子；逆境胁迫；顺式调控元件中图分类号S632文献标识码A文章

3、编号0517—6611(2014)11—03179—03CIoilingandFunctionAnalysisofPromoter^知矸’inCassavaXL、^n．rui，GU0Jian-churletal(CollegeofAculture，HainanUniversity，Haikou，Hainan570228；InstituteofTropicalBioscienceandBioteehnology，ChineseAcademyofTropicalAculturalSciences，Haikou，HMnan571101；KeyLabofTr

4、opicalCropsBiologicalandGeneticResoureesofMinistryofAgnculture．Haikou。Hainan571101)Abstract『Objective]Inordertostudythepromoter胁C删C1／5incassavawhichplayimportantrolesinplantgrowthanddevelopment，hor-moneregulationsandstressresponses．『Method]An1170bppromoterregionupstreamoftheCWI

5、NCV5genewasisolatedfromcassavage—nomicDNAusingPCRmethods．『Result]SequenceanalysisfoundthatitcontainsatypicalTATAboxandCAATbox，andseveralcis·actingele—mentsthatrelateplantstressresponses，suchasHSE，MBS，SARE，GARE—motif，TATC—boxtranscriptionfactor．[Conclusion]ItissuggestedthatMeCWI

6、NCV5genemayplayimportantrolesinresponsetovariousstresses．KeywordsCassava：Cellwallacidinvertase；Promoter；Stressresponsiveness；Cis—actingelement木薯是全球最重要的粮食作物之一，但是块根中积累的液加等体积氯仿一异戊醇(24：1，)混匀后离心；上清液用淀粉含量远远低于理论产量。蔗糖在淀粉积累过程中作为等体积苯酚一氯仿一异戊醇(25：24：1，WWV)和氯仿一异戊沟通源器官和库器官的桥梁，而在源叶中合成的蔗糖从叶醇(2

7、4：1，)反复抽提。加入1／10体积NaAc(3mol／L，(源)到块根(库)的长途运输过程主要由蔗糖转化酶(INV)pI-I5．2)和2倍体积冷乙醇以沉淀DNA(2h)，分别用70％、来调控完成。。蔗糖转化酶根据其最适pH值分为中性转80％乙醇洗涤沉淀并加人100IzlrI1E缓冲液回溶DNA沉淀，化酶(neutralinvertase，NI)和酸性转化酶(acidinvertase，同时加人2“lRNase，置37℃处理2h。再用等体积的苯AI)J。细胞壁酸『生转化酶催化蔗糖的分解是韧皮部卸载的酚一氯仿一异戊醇(25：24：1，WWV)和氯仿一异

8、戊醇(24：1，关键步骤J。在库器官中提高细胞壁酸性转化酶的活性有v／v)分别抽提，吸取上清液，重新沉淀DN