苎麻BnbZIP1转录因子基因的克隆与表达特征分析.pdf

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1、中国农业科学2013，46(7)：1314—1322ScientiaAgriculturaSinicadoi：10．3864~．issn．0578-1752．2013．07．002苎麻BnbZIPI转录因子基因的克隆与表达特征分析周精华，揭雨成，邢虎成，钟英丽，余伟林(湖南农业大学苎麻研究所，长沙410128；湖南省种质资源创新与资源利用重点实验室，长沙410128湖南农业大学生物科学与技术学院，长沙410128)摘要：【目的l克隆苎麻转录因子基因BnbZIP1，分析其序列及表达特征，同时进行原核表达以及亚细胞定位分析。【方法】根据苎麻转录组测序中的Unigene48

2、047片段序列，采用RT—PCR结合RACE技术克隆该基因的全长cDNA序列，并进行生物信息学分析；利用Rea1-timePCR分析该基因在不同组织和不同胁迫条件下表达特征；构建原核表达载体，进行原核表达；构建含EGFP的融合表达载体，观察其亚细胞定位情况。【结果】苎麻BnbZIP1的cDNA全长为2071bp，开放读码框为1407bp，编码468个氨基酸，推导该多肽的等电点和分子量为7．12和51．57kD，与毛果杨(XP一002307972)的bZIP基因氨基酸序列的相似性最高，达到93％；IPTG诱导产生的重组蛋白相对分子量约为52kD，与理论值一致；亚细胞定位

3、分析表明其定位在细胞核中；荧光定量PCR分析表明，该基因在苎麻根、茎、茎尖、叶片、雌花和雄花中均有表达，其中，在雄花中表达最高，在根中表达最低，且该基因受ABA、干旱和高盐诱导上调表达。【结论】获得了BnbZIP1的全长cDNA序列，其编码蛋白具有植物bZIP转录因子典型的结构域，且该基因响应ABA、干旱和高盐逆境胁迫，预示该基因可能在植物抗逆反应中发挥着重要的调控作用。关键词：苎麻；转录因子；bZIP；表达分析；亚细胞定位CloningandCharaCterizatiOnoftheBnbZIP1TranscriptionFactorGenefromRamie(Bo

4、ehmerianiveaL．)ZHOUJing—hua，JIEYu—cheng，，XINGHu．cheng，，ZHONGYing—li，，YUWei—lin(1InstituteofRamie,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128；HunanProvincialKeyLaboratoryofCropGermplasmInnovationandUtilization,Changsha410128；CollegeofBioscienceandBiotechnology,HunanAgriculturalUniversity,

5、Changsha410128)Abstract：【Objective】Theobjectiveofthisstudywastoclonethefull—lengthcDNAofBn6z1transcriptionfactorgenefromramie，andtheexpressionpaRemandthebioinformaticsofthesequencewereanalyzed，andtheprokaryoticexpressionandthesubcellularlocalizationwereanalyzed．【Method]Afull—lengthcDNAs

6、equencewasclonedbvIuPCRandRACEmethodsbasedontheunigene48047inramietranscriptomesequencing．ThenthesequencewasanalyzedthroughbioinformaticsmethodsandtheexpressionpaRemsofBnbZIP1wereanalyzedbyusingReal—timePCRinvarioustissuesandunderdifierentstressconditions．Aprokaryoticexpressionvectorwas

7、constructedandtheprokaryoticproteinexpressionwasinducedwimIPTGThenafusionexpressionvectorcontainingEGFPwasconstructedtoobservethesubcellularlocalization．【Result]Theful1．1engthcDNAsequenceandtheORFofB月6Z1were2071bDand1407bp。whichencoded468aminoacidswithpredictedpIandmolecularwei