条件恐惧刺激对大鼠杏仁核区神经细胞增殖的影响.pdf

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1、第34卷第3期第三军医大学学报Vo1．34．No．32012年2月15日JThirdMilMedUnivFeb．152012271文章编号：1000-5404(2012)03—0271-03条件恐惧刺激对大鼠杏仁核区神经细胞增殖的影响蒋丽珠，刘晨，陈旦，王慧，黄菊芳(671000云南大理，大理学院临床医学院神经精神教研室；410013长沙，中南大学湘雅医学院人体解剖学与神经生物学系)[摘要]目的探讨条件恐惧性刺激对大鼠杏仁核区神经细胞增殖的影响，分析杏仁核区新生神经细胞与恐惧记忆的关系。方法72只实验大鼠按随机数字表法分成条件恐惧刺激组和对照组，每组36只，条件恐惧刺激前3d动物腹腔内注射Br

2、dU标记新生神经细胞，条件恐惧刺激组大鼠采用单调声配对足底电击造成条件恐惧刺激模型，对照组大鼠仅给予单调声刺激。条件恐惧刺激后1、7、14、21、30、60d行动物行为学检测，后处死动物行BrdU的免疫组织化学染色。结果条件恐惧刺激后各时间点条件恐惧刺激组大鼠静止不动时间均明显高于相应时间点的对照组(P<0．01)，且条件恐惧刺激组动物杏仁核区BrdU免疫阳性细胞数明显少于同时间点的对照组(P<0．05)。结论条件恐惧刺激对大鼠杏仁核区新生神经细胞增殖产生负向影响，这可能与大鼠恐惧记忆的长期保持有关。[关键词]条件恐惧性刺激；新生神经细胞；杏仁核；大鼠[中图法分类号]R322．81；R329．

3、28；R338．6[文献标志码]A恐惧是一种在动物进化过程中保存下来的基本情次)标记增殖的神经干细胞，3d后动物放入自制的条件恐惧刺感，它可以使动物在面临威胁时激发一系列防御反应激箱内，条件恐惧刺激箱规格为15cm宽×15cm长×50cm高，四壁由木板做成，其“地板部分”由平行的不锈钢柱(直径并生存下来。而病理性恐惧的习得及恐惧的延迟或不5mm，相邻2个不锈钢柱的圆心之间的距离为1cm)组成，这些能消退在人类的创伤后应激障碍、焦虑和恐怖症中发不锈钢柱通过一电阻与220V电源相连，保证电流为0．75mA；挥着重要作用。大量研究表明应激可使海马齿状回新并有一手控装置，能随时中断或接通电源。在条件恐

4、惧刺激箱生神经细胞增殖减少I2。杏仁核为脑内参与恐惧学其中一个角的上部装一个扬声器可产生2000Hz的单调音。习、记忆的主要核团，特别是外侧杏仁核(1ateralamyg-大鼠给予0．75mA的电流通过5s，通电前及通电过程中给予dala，LA)，为条件恐惧记忆储存的可塑性位点，恐惧记持续10s2000Hz的单调声刺激；这一配对刺激间隔90s给予忆的形成伴随着杏仁核的背外侧核可塑性的改变J，1次，每天给予30min的刺激，连续2d。对照组动物放入条件LA及其邻近区域的损害或功能可逆失活可阻止大鼠恐惧刺激箱内不予电击，但仍给予单调声刺激。所有动物在放恐惧记忆的获得和先前所获得的恐惧记忆的表达J。

5、人条件恐惧刺激箱后给予条件恐惧刺激前观察1min内的静止但关于条件恐惧刺激对杏仁核区新生神经细胞的影响不动时间，以求其静止不动时间的基线。仍未知，本实验采用条件恐惧刺激动物模型，结合行为1．3动物恐惧记忆行为学观察学、免疫组织化学方法观察条件恐惧刺激后大鼠的静止动物在完成以上刺激后的1、7、14、21、30、60d进行以下实不动时间及其杏仁核区新生神经细胞数目的变化，以期验：动物放回条件恐惧刺激箱内，不予通电，仍给予单调声刺激，8min内观察动物静止不动的时间。探讨恐惧记忆得以保持的神经生物学机制，为缓解恐惧1．4组织制备刺激导致的精神障碍的治疗提供一定的理论依据。动物表现出恐惧记忆的行为学反

6、应后，在麻醉状况下用1材料与方法4％多聚甲醛经左心室灌注固定，取脑并将脑组织置于相同固定液中后固定，4℃冰箱过夜，用梯度蔗糖浸泡沉底，一20℃三1．1实验动物顿恒低温切片机切片，片厚40m。留取含杏仁核区的脑组织72只成年健康雄性sD大鼠(体质量200～250g)，购自湖切片备用。南农业大学实验动物学部，按随机数字表法分为条件恐惧刺激1．5免疫组织化学染色组和对照组，每组36只，每个时间点6只。动物自由进食及饮每只动物脑组织从距前囟一348一一1．92mm，取6张杏水，在进行实验前先予动物适应6d，在这期间实验者每天抚仁核区结构完整的脑片每隔6张选取1张切片，以保证所观察摸大鼠5min以使之适

7、应。所有的行为学检测在8：30—10：30的部位大体接近，用于BrdU免疫组织化学染色。取脑组织冰间进行。冻切片用0．O1mol／LPBS缓冲液清洗后，置于95℃的枸橼酸1．2条件恐惧模型的制备钠溶液中30rain(pH值6．0)，清洗后，再置于2mol／L盐酸中大鼠腹腔注射BrdU(200mg／kg，每12小时1次，共注射230min(为使核变性)，清洗后用3％双氧水溶液中处理15min．[基金