植物乳杆菌ST-Ⅲ的β-果糖苷酶在大肠杆菌中的表达及优化.pdf

《植物乳杆菌ST-Ⅲ的β-果糖苷酶在大肠杆菌中的表达及优化.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生物王程农品，lI斜技Vo1．35，Wo．11，2014植物乳杆菌ST—m的一果糖苷酶在大肠杆菌中的表达及优化陈臣，周方方，任婧，刘振民，陈卫(1．江南大学食品学院，江苏无锡214122；2．乳业生物技术国家重点实验室，光明乳业股份有限公司研究院，上海200436)摘要：为了了解植物乳杆菌利用低聚果糖的机理，以一株具有良好的利用低聚果糖能力的植物乳杆菌sT一Ⅲ基因组为模板，成功地扩增出B一果糖苷酶基因(sacA)，基因片段长度为1506bp，编码501个氨基酸。将扩增出的目的片段克隆到pet28(a)(+)

2、载体上，在大肠杆菌中进行表达，井优化了表达条件。IPTG浓度0．1mmol／L，诱导温度为16~C，诱导12h是该酶的最佳表达条件，比酶活为3．4U／mg；亲和层析纯化后，比酶活达到107．0U／mg。关键词：植物乳杆菌，B一果糖苷酶，低聚果糖Expressionandoptimizationofap—fructofuranosidasefromLactobacillusplantarumST-111inEscherichiacoilCHENChen，ZHOUFang—fang，RENJing，LIUZhe

3、n—rain，CHENWei'(1．SchoolofFoodScienceandTechnology，JiangnanUniversity，Wuxi214122，China；2．StateKeyLaboratoryofDairyBiotechnology，InstituteofBrightDairy&FoodCo．，Ltd．，Shanghai200436，China)Abstract：ToestablishthemolecularmechanismsoffructOO1iqOsaccharidesareme

4、tabolizedbyLactobacillusplantarumspecies，aB—fructofuranosidasegene(designatedsacA)fr0mafructooIlgosacchar}des—fermentingstrainLactobacillUSP／a几farumST一ⅢwasclonedintoEscherichiacoil．andtheover—expressionconditionsoftherecombinantproteinwereoptimized．ThesacA

5、genefrOmL．plantarumST一Ⅲconsistedof1506nucleotides．encodinga501aminoacidpolypeptide．Thespecificactivityofenzymewas3．4U／mgwheninducedwith0．1mm0I／LIPTGfor12hat16oc．Theenzymewasthenpurifiedwithnickelionaffinitychromatographyandthespecificactivitywas107．OU／mgfo

6、rthepurifiedrecombinantprotein．Keywords：Lactobacillusplantarum：B—fructofuran0sidase；fructooIlgosaccharides中图分类号：Q786文献标识码：A文章编号：1002—0306(2014)11—0155—05doi：10．13386／j．issnl002—0306．2014．11．026低聚果糖(Fructooligosaccharides，FOS)又名蔗果键水解。B一呋喃果糖苷酶属于糖苷水解酶32家低聚糖，是

7、指1—9个果糖基以p一2，1键或p一2，6键族，能够水解蔗糖和低聚果糖，此外还可水解菊糖、连接在蔗糖的D一果糖基上而形成的混合物。低聚水苏糖、棉子糖等。双歧杆菌的呋喃果糖苷酶已被果糖不能被人体直接消化吸收，当它到达人体胃肠广泛报道，包括底物动力学、底物多样性、最适反应道时，可有选择地刺激肠道中有益菌(如双歧杆菌和条件等；然而对乳杆菌的果糖苷酶报道还很少。部分乳杆菌)增殖⋯，同时代谢产生的短链脂肪酸，本实验室的前期研究发现植物乳杆菌ST一111具使肠道内pH降低，抑制外源性致病菌和肠道内固有有良好的利用低聚果

8、糖的能力。为了研究其代谢低真菌等的生长繁殖，起到调节肠道菌群的作用。聚果糖的机理，本实验将其果糖苷酶基因克隆到大双歧杆菌和乳杆菌之所以具有利用低聚果糖能肠杆菌中，构建了果糖苷酶基因重组菌。之后对其力是因为它含有能分解B一2，1键或B一2，6键糖苷键表达条件进行研究，以期得到良好的酶活及较高的的酶——p一呋喃果糖苷酶。B一呋喃果糖苷酶表达量，从而为进一步了解乳酸菌的代谢低聚果糖(D—fructofuranosida