PtWRKY14基因转化烟草及对TMV的抗性影响研究.pdf

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1、130广东农业科学2014年第7期PtWRKY14基因转化烟草及对TMV的抗性影响研究王兴．林善枝(北京林业大学生命科学与技术学院，北京100083)摘要：PtWRKY14是从毛白杨中获得的WRKY基因．为研究RKl，14基因对植物抗病性的影响．构建了毛白杨PtWRKY14基因的植物表达载体pBI121一W14，通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草，PCR与Southern杂交进行转基因烟草鉴定。对获得的转基因烟草植株进行烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)的接种试验，结果表明PtWRKY14基因的转化使烟草对TMV的抗性增强。荧光定量P

2、CR检测结果表明，TMV接种后，转基因烟草中PtWRKY14的表达量显著上调，同时转基因烟草中超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)、过氧化物酶(Peroxidase，POD)、过氧化氢酶(Catalase，CAT)的表达量均高于对照组。因此，PtWRKY14可能通过上调SOD、POD、CAT的表达从而增强植物抗病性。关键词：PtWRKY14；转基因烟草；烟草花叶病毒；抗病性中图分类号：$572．01文献标识码：A文章编号：1004—874X(2014)07—0130—04ResearchonexpressionofPtWRKYI4i

3、ntransgenictobaccoandresistancetoTMVWANGXing，LINShan—Zhi(CollegeofBiologicalSciencesandBiotechnology,BeijingForestryUniversity,Beijing100083，china)Abstract：PtWRKY14iSaWRKYgenefromPopulustomentosa．Thestudywasconductedtoinvestigatetheeffectsof尼l，14onplantdiseaseresistance．ThegenePtWRK

4、Y14wasconstructedintobinaryvectorpBI121andtransformedintotobaccoplantsbyAgrobacterium—mediatedleafdisctransformation．TransgenictobaccoswereidentifiedbyPCRandSouthernhybridization．TheresultsoftobaccomosaicvirusfTMV1infectiontestshowedthattransgenictobaccopossessedcertainresistancetoT

5、MVinfection．Theexpressionof尼Ky14，superoxideDismutase(SOD)，peroxidase(POD)andcatalasefCAT)wereanalyzedbyreal-timePCR．TheresultshowedRKl，14wasup—regulatedexpressionbyTMVtreatment．WhiletheexpressionsofSOD．PODandCATi1'1transgenictobaccoweremorethaninblankcontroltobacco．Theseresultssugge

6、stedthatl，14mightbeup-regulateexpressionofSOD．PODandCATleadingtoenhancedplantdiseaseresistance．Keywords：PtWRKY14；transgenictobacco；tobaccomosaicvirus；diseaseresistanceWRKY转录因子是在植物中广泛存在的一大类转录因子在植物抵抗生物胁迫的过程中起到重要的调控录因子，目前已在拟南芥中发现64个_11，大豆中发现作用，是防卫反应信号传递网络的重要组成部分。水稻197个[21，杨树中发现104个[3]。

7、WRKY转录因子因其蛋中OsWRKY3是一种受SA(水杨酸)调控的转录因子，白质N一端含有高度保守的氨基酸序列WRKYGQK而过表达尺Ky3的转基因水稻增加了NPRI、PRlb、得名，其高度保守的约60个氨基酸残基被称为WRKY苯丙氨酸解氨酶(ZB8)和过氧化物酶(POX22．3)的表域。根据WRKY域的数量及其锌指结构特征的差异，达，可以增强水稻抵抗稻瘟病的能力l。FaWRKY1是草莓可以将WRKY蛋白家族分为3个亚家族。WRKY转中发现的第1个WRKY转录因子，过表达FaWRKY1可以增强氧化猝发(oxidativeburst)，从而显著地增强了植株的抗性

8、嘲。过表达PtWRKY23的转基因杨树