转梨lchi1基因烟草对腐烂病菌的抗性研究

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1、％６ｉＯ巧８分类号１．２：：学校代码口３２０２０３７３密级：：公开学号ｉ？ｆ务ｆ乂＃硕击学位论文转梨Ｌｃ／ｚ／／基因烟草对腐烂病菌的抗性研究ＳｔｕｄｉｅｓｏｆＴｒａｎｓｅｎｉｃＴｏｂａｃｃｏＥｘｒｅｓｓｉｎＰｅａｒＬｃ／ｉ／７ＧｅｎｅａｎｄｇｐｇＴｈｅｉｒＰｏｔｅｎｔｉａｌｆｏｒ惦ｋ＂ｃｗ曲￣研究生姓杂李伟阳导师姓名及职称曹斌副教授合作导师姓名及职称学位口类级別农学硕壬专並養称果树学研究方向果树生妨技术

2、？＇＇．Ｉ．＇！中和帛＇所在学院林学与园艺学琼ｉ■新疆？鸟鲁木齐；＿；？—二〇五年六月．Ｖ．Ｖ；－Ｉ－三．，．．■■＇Ｉ＇．．Ｖ苗＞－１独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除Ｔ文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己

3、在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：＊＾〇时间：谭巧／Ｕ＾种（＾／｜关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目｜ｊ：新疆农业大学有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文档，可切采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文入被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论义的全部或部分内容编有关数据库进行检索，可公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密研的学位论文在解密后应遵守此协议）究生签名时

4、间：么，ｒ年／月／？日导师签名：时间；品年＾月日，本文是国家“863计划”项目“梨分子育种与品种创新”（项目编号：2011AA10020604）新疆自治区十二五科技重大专项“新疆特色果树种质资源利用技术研究与示范”（项目编号：201130102-1）国家林业公益性行业科研专项“新疆特色林果优良品种选育与推广”（项目编号：201304701-1）新疆维吾尔自治区果树学重点学科基金“果树学”（项目编号：201007）国家果树瓜类改良中心建设项目“新疆分中心”（项目编号：20111908）的部分研究成果课题

5、主持人：李疆教授（新疆农业大学）转梨Lchi1基因烟草对腐烂病菌的抗性研究摘要梨是经济价值很高的作物，但其自身对病菌的抵抗力相对较弱，造成果树减产情况严重，其中梨树腐烂病是中国梨病害的一个重要分支。通过化学防治效果差且费工费时，因此，抗性育种成为果树科研工作者的重要研究对象。梨为多年生木本植物，童期较长，且高度杂合，采用传统方式筛选抗病品种，并对其子代进行抗病鉴定需要的时间较长。在这种情况下，对梨树进行分子层面上的改良，可以解决杂交育种的难题，缩短育种周期，提高育种效率，为果树育种开辟了一条新的道路。所以，基

6、因源的获得和其功能探索是分子抗病辅助育种成功的关键。本试验根据Genebank中已公布的不同植物的几丁质酶基因，分析得到保守片段，在梨基因组数据库中进行Blast比对，调取DNA序列，以高抗腐烂病品种‘小香水’（PyrusussuriensisMaxim.„Xiaoxiangshui‟）为研究材料，克隆获得梨几丁质酶Lchi1基因cDNA全长，并进行初步分析和基因转化功能验证。本研究的主要结果如下：1.砀山酥梨基因组数据库中调取的DNA序列大小为2535bp，含有3个外显子区（441bp、157bp、696b

7、p）和2个内含子区（695bp、547bp）。‘小香水’序列比数据库调取序列多出（TCTTCG）6个碱基，可能会导致种与种之间的差异。2.Lchi1基因全长1300bp，编码322个氨基酸，其蛋白的分子式为C1607H2407N415O468S17，分子量为35573.3Da，理论等电点为7.10。基于无规则卷曲和α-螺旋的二级结构，三级结构是高度保守的。Lchi1编码蛋白为可溶性胞外蛋白，存在少量潜在磷酸化位点，是糖苷水解酶第19族中的一员，存在信号序列，但是缺乏几丁质结合区。Lchi1基因属于CLASSⅡ

8、几丁质酶基因，与其它科属植物的该类基因相似性均较高。3.构建梨Lchi1基因的表达载体，通过农杆菌将该基因导入到烟草当中，对转基因T0-T2代烟草进行PCR及RT-PCR筛选。Lchi1基因已经转化到烟草中，并在T2代烟草中有效表达。4.利用离体叶片接种法，更直观地验证转Lchi1烟草T2代与梨腐烂病菌之间的抗性关系。接种腐烂病菌后，转基因烟草较未转基因烟草的抗腐烂病菌能力明显增强。梨几丁质酶基因L