琥珀酸含量剂盒说明书.doc

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1、琥珀酸含量试剂盒说明书HPLC法50管/48样注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定测定意义：有机酸是果实中主要的风味物质，器含量的高低与果实的品质密切相关。琥珀酸（包括盐类）可产生酸味、呈味，可用于豆酱、酱油、日本酒、调味料等。琥珀酸钠具有贝类特殊滋味的白色结晶粉末，在食品工业中用于调味剂、酸味剂、缓冲剂，用于火腿、香肠、水产品、调味液等。琥珀酸可以用做防腐剂，pH值调节剂,助溶剂;还可以用来合成解毒剂、利尿剂、镇静剂、止血药、合成抗生素以及维生素A、维生素B等。作为离子螯和剂,琥珀酸用于在电镀行业防止金属的溶蚀和

2、点蚀;丁二酸是一种良好的表面活性剂,是去垢剂、肥皂和破乳剂的组分;丁二酸可生产脱毛剂、牙膏、清洗剂、高效去皱美容酯。丁二酸还用于润滑剂、添加剂、弹性体中。纺织品加工中可上浆防收缩,改进染色性。改进己内酰胺黏度与防火性等。测定原理：琥珀酸的折光率与所需流动相的折光率存在差异，，可以利用示差折光率检测器（RID）检测，利用高效液相色谱法测定其含量。需自备的实验用品：高效液相色谱仪（耐水C18柱，RID检测器）、低速离心机、超声波清洗器、溶剂抽滤装置、滤膜（水系和有机系各1个，0.45μm）、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、可

3、调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、甲醇（色谱级）、磷酸二氢钠、磷酸和超纯水。试剂的组成和配制：试剂一：液体80mL×1瓶，4℃保存；试剂二：琥珀酸标准品0.5mg×1支，2-8℃保存。（0.5mg琥珀酸于1.5mLEP管中）实验前的准备工作：1、将超纯水800mL和甲醇20mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：蒸馏水用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。2、流动相的配制：称量1.56g磷酸二氢钠溶于800mL水中，加入16mL甲醇，用磷酸调节溶液pH为2.8。3、将配好的流动相超声30分钟，以

4、脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。琥珀酸的提取：称取约0.5g样本，放入研钵中磨碎，加入0.5mL预冷的试剂一，移入EP管内，超声提取60min。10000g离心10min，提取上清液。残渣用0.2mL试剂一超声20min，10000g离心10min，合并两次上清液，用试剂一定容至1mL，取适量溶液用针头式过滤器过滤于带有内衬管的样品瓶内待测。标准品的配制：在试剂二中加入1mL纯水，配成500μg/mL母液，将母液用纯水分别稀释成100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、10μg/mL和5μg/mL的琥珀酸标准品溶液。针头式

5、过滤器过滤后待测。琥珀酸含量测定操作步骤：1.开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设置进样量10μL，流速0.6mL/min，柱温25℃，走样时间为20min，设置完毕保存方法组。2.用流动相过柱子，待基线稳定后开始加样。4.加入标准品10μL，在20min内可分离琥珀酸，琥珀酸的保留时间在12min左右，（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的琥珀酸标准品的峰面积。5.加入样品10μL，在相应保留时间处检测琥珀酸的峰面积。琥珀酸含量的计算：以标准品浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标计算琥珀酸标准曲线

6、。将样品峰面积代入标准曲线，计算样品中琥珀酸含量。注意事项：1、为了避免使用过程中柱压变化过大，流速由小到大调节。2、使用完毕后，需用纯水作为流动相冲洗柱子30min，防止无机盐结晶堵塞色谱柱。3、标准品的稀释倍数要根据样品中琥珀酸浓度确定，样品中琥珀酸的峰面积必须落在琥珀酸标准品峰面积的上下限之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。