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1、COX-2在乳腺癌组织中的超微结构定位及其意义［摘要］目的:观察C0X-2蛋白在乳腺癌组织中的超微结构定位及其意义。方法:采用胶体金标记免疫电镜方法检测22例乳腺癌组织标本，观察COX-2蛋白在乳腺癌组织中的定位。结果:胶体金标记免疫电镜显示,59.1%的乳腺癌组织中存在黑色、圆形、集中的胶体金颗粒。结论:COX-2蛋白超微结构定位于乳腺癌细胞的内质网与核膜上,可能与乳腺癌形成过程中蛋白质的合成和转运有关。［关键词］乳腺癌；COX-2;超微结构;免疫电镜［中图分类号］R737.9［文献标识码］B［文章编号］167
2、3-7210(2010)04(a)-035-02LocationofultrastructureandsignificanceofCOX-2inbreastcancertissueLIYuanyuan,LIUYuqing*,WUIlongjuan(WeifangMedicalCollege,Weifang261053,China)［Abstract］Objective:ToobservethelocationofultrastructureandsignificanceofCOX-2proteininbreast
3、cancertissue.Methods:Weusedimmuno-electronmicroscopymethodtodetecttheexpressionofCOX-2proteinin22casesofbreastcancertissue,andthelocationofCOX-2proteinwasobserved.Results:Immuno-e1ectronmicroscopyshowedthat59.1%ofbreastcancerexistedinblack,round,concentratedc
4、olloidalgoldparticles,COX-2granulesexistedinendoplasmicreticulumandnuclearmembrane.Conclusion:COX-2proteinexistsinendoplasmicreticulumandnuclearmembraneofbreastcancertissue,itmayberelatedtobreastcancerduringtheformationofproteinsynthesisandtransport.［Keywords
5、］Breastcancer;COX-2;Ultrastructure;Immuneelectronmicroscopy乳腺癌是严重危害世界女性健康的恶性肿瘤，其发病率不断上升，发病年龄日趋年轻，已引起人们的高度重视。环氧合酶-2(C0X-2)属环氧合酶系，是花生四烯酸合成前列腺素过程中的重要限速酶。近年来,随着对C0X-2认识的不断深入，发现乳腺癌组织中存在COX-2的表达,且C0X-2的表达与乳腺癌的发生及发展密切相关［1］°因此,C0X-2成为目前乳腺癌防治的研究热点，找出COX-2蛋白在乳腺癌组织中的超微结
6、构定位，对于指导临床治疗乳腺癌具有重要意义。1材料与方法1.1试剂免抗人C0X-2单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司;胶体金标记的羊抗兔IgG购自北京博奥森生物技术有限公司。1.2免疫电镜检测离体0.5h内新鲜乳腺癌标本22例,立即置于含饱和苦味酸的多聚甲醛溶液中固定4〜6h,而后以0.1%PBS反复漂洗，再以20%蔗糖沉淀。振荡切片机切片，载于200〜300目的锐网上。染色步骤:将切片置于1%H202液滴上10min,双蒸水喷洗，正常羊血清(1：20稀释)封闭,TBS洗涤,用滤纸吸干网缘水分，滴加C0X
7、-2抗体,4°C冰箱孵育过夜。以TBS代替一抗为阴性对照，冰箱中取出蜡板复温30min,TBS洗涤、喷洗，滴加胶体金标记的羊抗兔TgG,TBS洗涤、喷洗，1%戊二醛室温固定,TBS洗涤、喷洗，双蒸水喷洗，醋酸铀-枸椽酸铅复染,透射电子显微镜观察结果。2结果透射电镜下可见,59.1%乳腺癌细胞的内质网与核膜上存在黑色、圆形、集中的胶体金颗粒,表明乳腺癌组织中存在C0X-2蛋白的表达(图1)。以TBS代替一抗的阴性对照组未见C0X-2阳性金颗粒。图1乳腺癌细胞中C0X-2蛋白的表达(X20000)3讨论C0X-2是花
8、生四烯酸合成前列腺素过程中的重要限速酶，生理状态下，其在人体大多数组织中不表达，但在生长因了或细胞因了、炎症介质等多种刺激因素的作用下可被迅速诱导表达[2]oSingh等[3]采用Westernblotting方法探测到C0X-2蛋白在乳腺癌组织中出现过表达。Nakopoulou等[4]利用免疫组化方法发现所测乳腺癌标本中66.9%出现C0X-2的表达，并通过测定p53.
