肌成纤维细胞促进小鼠胚胎肝干细胞的增殖和分化.pdf

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1、中国细胞生物学学报ChineseJournalofCellBiology2014，36(7)：927—933DOI：10．11844／~cb．2014．07．0085肌成纤维细胞促进小鼠胚胎肝干细胞的增殖和分化谢言杜文俊李德卫(重庆医科大学附属第一医院肝胆外科，重庆400016)摘要移植细胞的增殖和分化需要微环境支持。作为最重要的微环境成分，肌成纤维细胞在肿瘤的生长过程中发挥着重要作用。该实验Hepal一6肿瘤细胞上清液在体外激活成纤维细胞分化为肌成纤维细胞，探讨肌成纤维细胞上清对小鼠胚胎肝干细胞(embryonichepaticstemcells，EHSCs)HPl4．5增殖和

2、分化的影响。实验-]~EHSCsHP14．5分为三组：DMEM培养液处理组(DMEM组)、成纤维细胞上清液处理组(cMFb组)及肌成纤维细胞上清液处理组fcMAFb组)。MTT法绘制三组HP14．5细胞生长曲线图，免疫荧光法~Rea1．timePCR法检分别测白蛋白(albumin，ALB)、甲胎蛋白(alphafetoprotein，AFP)、细胞角蛋白18(cytokeratin18，CK18)的蛋白~mRNA表达情况，PAS染色法检测糖原合成状况。MTT法检测显示，CMAFb组胚胎肝干细胞增殖明显速度较其他两组快。免疫荧光染色及Real—timePCR结果显示，HP14．5

3、培养5d后，CMAFb组ALBf~,CK18的蛋白及mRNA表达水平以及糖原合成水平显著高于CMFb组~DMEM组，r~AFP蛋白和mRNA表达水平明显降低。该实验表明，Hepa1．6激活的成纤维细胞能促进胚胎干肝细胞的增殖以及分化为有功能的成熟肝细胞。关键词肌成纤维细胞；胚胎肝干细胞；白蛋白：细胞角蛋白18；甲胎蛋白MyofriboblastPromotestheProliferationandDifferentiationofMouseEmbryonicHepaticStemCellsXieYan，DuWenjun，LiDewei(DepartmentofHepatobili

4、arySurgery,FirstAfiliatedHospitalChongqingMedicalUniversity,Chongqing40001~China)AbstractMicroenvironmentISveryimportanttoproliferationanddiferentiationoftransplantedcells．Asacrucialcompositionofthemicroenvironmentintumor,myofibroblastinfluencethedevelopmentoftumorcellsdeeply．Thisstudyfocuses

5、ontheeffectoffibroblastandmyofibroblastontheproliferationofembryonichepaticstemcells(EHSCs)HP14．5．Inthisresearch，twosortsofconditionedmediumwereharvestedfromthesupemateoffibroblast(CMFb)andthesupernateofmyofibroblast(CMAFb)whichcamefromtheHepal一6induceddifferentiationoffibroblastinvitro．TheEH

6、SCsHP14．5weredividedin3groups：DMEMgroup，CMFbgroupandCMAFbgroup．MTTwasusedtodrawthecurvesofcellgrowth．Immunofluorescencestainingandreal—timequantitativepolymerasechainreaction(Real·timePCR)wereperformedfordetectingthealbumin(ALB)，alpha—fetoprotein(AFP)andcytokeratin18(CK18)inproteinandmRNAexpr

7、essionleve1．AndthePASstainingwasusedtodetectGlycogensynthesis．Intheresults，MTTshowedfasterproliferationofliverstemcellsinCMAFbgroupcomparedwithothergroups；TheReal—timePCRshowedthatthemRNAexpressionofALBAFPandCK18in收稿日期：2014．03．21接受日期：2014．04．