农杆菌介导phyA基因转化玉米愈伤组织培养体系的优化.doc

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1、农杆菌介导phyA基因转化玉米愈伤组织培养体系的优化摘要：以根癌农杆菌(Agrobacterium)EHA105介导外源基因phyA转入玉米(ZeamaysL.)自交系GS01的胚性愈伤组织，并利用除草剂(草胺磷)筛选出抗性愈伤组织，培养并获得再生植株。结果表明，菌液浓度及侵染时间显著影响愈伤组织的转化率；不同激素种类及配比对抗性愈伤组织再生植株的影响明显。当菌液浓度0D600nni为0.6,侵染时间为20min时，抗性愈伤组织的转化率最高，达到了68.7%,为玉米农杆菌转化并获得再生植株奠定了基础。关键词：农杆菌(Agrobacterium);玉米(Zeamay

2、sL.)自交系；遗传转化;phyA基因中图分类号：S513.032文献标识码：A文章编号：0439-8114(2015)02-0465-03D0I：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.054OptimizingConditionsofTransform!ngphyAGeneintoMaizewithAgrobacteriumXUDan-dana,WANGPi-wub,ZHAOHan-dana,LIUShuanga,CHENGZhao-tinga,GUANShu-yana(a.CollegeofLifeSciences;b.C

3、ollegeofAgronomy,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China)Abstract：ForeigngenephyAwastransferedtoembryoniccallusofmaizeinbredlinesGS01withAgrobacteriumEHA105-mediated.Herbicides(alachlorP)wereusedtoscreenresistant,callusandregenerateplantlets.Theresultsshowedthatbacteriaconce

4、ntrationandinfectiontimeaffectedcallusconversionratesignificantly.Typesofhormoneandproportionaffectedobviouslyregenerationplantletofresistantcallus.Bacteriaconcentrationwas0.6at0D600nm.Infectiontimewas20min.Resistantcallusratewashighwith68.7%.Itwi11provideagoodreferencefortheregenerat

5、ionandtransformationofmaizemediatedbyAgrobacterium.Keywords:Agrobacterium;maizeinbredlines;genetictransformation;phyAgene玉米(ZeamaysL.)是粮食作物中重要的工业原料，在全世界粮食生产中占有举足轻重的地位[1-3]。2010年，我国玉米种植面积达到了324万而2,成为世界第二大玉米生产国，而玉米也成为了我国的“谷物之王”[4]0玉米在我国经济生产中占有重要地位，因此大力提高玉米的产量及品质，成为了众多学者积极探寻的问题[5-7]o植酸酶能

6、有效地水解食物以及土壤中植酸态有机磷，释放出生命体可以直接吸收利用的无机磷酸及其铁、钙、锌、镁等盐类，有效地提高了其生物利用率。因此，植酸酶基因克隆及导入受体组织并获得可再生植株对研制植酸酶食品或饲料添加剂、开发高级保健食品和优质饲料、循环利用土壤中有机磷、缓解全球性磷矿产资源危机等具有重要意义[8-13]o木研究以玉米自交系GS01的胚性愈伤组织为材料，将连有根部特异性启动子和植酸酶基因phyA的载体转入玉米自交系中，对影响农杆菌介导的玉米遗传转化的因素进行探讨，从而确定了农杆菌介导转化的最佳菌液浓度及最佳侵染时间，优化了农杆菌介导卡米遗传转化条件，并成功获得玉

7、米抗性苗，为基因工程育种打下了基础，为获得含有PhyA基因的转基因玉米植株提供了条件，同时为进一步提高玉米的产量及品质的研究奠定了基础。1材料与方法1.1材料1.1.1外植体采用玉米自交系GS01的胚性愈伤组织作为遗传转化的受体进行转化，由吉林农业大学生物技术中心实验室提供。1.1.2菌种含有phyA基因和玉米根部特异启动子基因构建的重组质粒pCAMBTA3301-ZmGLUlP-PhyA-Nos的根癌农杆菌EHA105,由吉林农业大学生物技术中心实验室保存并提供。1.1.3培养基木试验所用的培养基见表1。1.2方法1.2.1抗性愈伤筛选标记的确定本研究所构建的表

8、达载体为B