紫花玉簪愈伤组织的诱导及农杆菌介导遗传转化体系的建立

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1、分类号：单位代码：10193密级：学号：2012208硕士学位论文紫花玉簪愈伤组织的诱导及农杆菌介导遗传转化体系的建立StudiesonCallusinductionandtheestablishmentofagrobacteriummediatedgenetictransformationsystemofHostaventricosa作者姓名：徐丽萍学位类别：理学硕士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：生物大分子结构与功能指导教师：刘洪章所在学院：生命科学学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指

2、导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学

3、所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要紫花玉簪(Hostaventricosa

4、)又称紫萼、紫玉簪。属百合科玉簪属多年生宿根草本植物，紫花玉簪不仅花、叶具有观赏价值，还具有很强的适应性，栽培管理较容易，因此近些年在国内外已成为随处可见的林下地被植物，可谓是绿化的新宠。此外，紫花玉簪还具有一定的食用和药用价值[1]，然而目前国内外所有玉簪品种都存在着单花花期短,花色仅限制在白色花和紫色花两种，且有缺乏香气，繁殖系数低、周期长等缺陷。以往通过传统杂交育种对玉簪新品种进行选育,但由于育种周期长和物种局限性的影响很多性状通过传统育种方式和很难获得。例如只能改变玉簪叶子的性状（大小、高矮、形状、产生嵌合体等），而玉簪的花

5、色除白色紫色外没培育成其他颜色，转基因技术可以很好的克服这些缺点,为改良和修饰花卉性状提供了一条捷径，现在对玉簪组织培养扩繁研究报道较多，但以玉簪为外植体进行转基因方法的研究还未见报道。本研究选用紫花玉簪为实验材料，并通过组织培养技术和农杆菌介导法进行了愈伤组织的诱导、增殖及遗传转化的研究，得出了不同外植体诱导愈伤组织、增殖所需的不同激素种类及适宜的浓度。从不同转化受体，农杆菌侵染浓度，侵染时间，乙酰丁香酮(AS)浓度,侵染方式等因素进行探索，本实验筛选出了最佳转化条件，建立了基因转化体系，为基因工程育种定向培育玉簪新品种奠定良好的

6、基础。1.不同外植体愈伤组织的诱导及增殖以叶片、叶柄、花梗、腋芽为外植体进行愈伤组织的诱导，花梗是最佳诱导愈伤的外植体，其愈伤诱导率最高为91%。最佳培养基为MS+6-BA2.0+NAA0.3(单位mg/L)。愈伤增殖最佳培养基为MS+6-BA3.0+NAA0.4+2,4-D0.2(单位mg/L),增殖率最高可达95%。2.研究了影响遗传转化的因素，优化了转基因体系。以紫花玉簪的愈伤组织，花梗，幼芽，为转化受体，通过滴加和浸泡两种侵染方式将携有pCAMBIA3300-GUS的农杆菌EHA105菌株侵染转化受体，最佳草铵膦筛选浓度40

7、0mg/L，对转化条件进行筛选：浸泡侵染方式最佳转化受体为愈伤组织，最佳侵染时间为10min，最佳侵染菌液浓度（OD600）为0.6，最佳乙酰丁香酮浓度(AS)为150μmol/L，滴加侵染方式最佳转化受体为愈伤组织，最佳侵染菌液浓度（OD600）为0.4，最佳乙酰丁香酮浓度(AS)为100μmol/L。两种侵染方式进行分析比较，滴加方式得出的转化率要高于浸泡方式所得转化率。3.对抗性筛选培养后的植株进行PCR检测和GUS染色检测关键词：紫花玉簪，组织培养，农杆菌介导，遗传转化IAbstractHostaventricosa,als

8、oknownascalyxpurple,purplehost.itisLiliaceaehostperennialperennialrootherb,H.purpleflowersandleavesnotonlyhavetheorna