槲皮素诱导大鼠肝细胞I型血红素氧化酶表达的分子机制.pdf

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1、中华肝脏病杂志2013年l1月第2l卷第l1期ChinJHepatol，November2013，Vo1．21，No．11·865·槲皮素诱导大鼠肝细胞I型血红素氧化酶表达的分子机制侯伟刘爽姚平刘烈刚覃华【摘要l目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞中I型血红素氧化酶(HO一1)诱导的分子机制。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。不同剂量槲皮素作用大鼠原代肝细胞不同时间后，用RT-PCR方法检测HO-1的mRNA表达；50mol／L槲皮素分别与10“mol／LPD98059、10mol／LSB203580、10

2、mol／LSP600125、1“mol／LWortmannin共孵育原代大鼠肝细胞12h后，用RT-PCR、Westernblot法检测H()_1mRNA和核因子E2相关因子2(Nf2)蛋白表达水平的变化。对数据进行单因素方差分析、Bonferroni检验。结果大鼠原代肝细胞经25～200mol／L槲皮素处理12h，或用50mol／L槲皮素处理4～12h后，HO一1的mRNA表达水平较对照组明显升高(尸值均

3、2，t=19．520，P<0．01)，胞核内Nf2蛋白的表达也被PD98059明显抑制(0．14士0．04与0．04±0．01，f=4．114，尸<0．05)。结论槲皮素可能通过细胞外信号调节激酶／Nrf2信号转导通路诱导大鼠原代肝细胞H0—1的表达。【关键词】肝细胞；有丝分裂素激活蛋白激酶类；血红素氧化酶(脱环)；槲皮素l核因子E2相关因子2Potentialmolecularmechanismsofquercefin-inducedhemeoxygenase-1inratprimaryhepatocyte

4、sHOUWei*LIUShuang,YAOPing,LIULie-gang,QINHua．*DepartmentofGastroenterology,TonalHospitalofTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430034ChinaCorrespondingauthor．"QINHua,Emaihdrqinhua@163．cornIAbstractlObjectiveToinvestigatetheposs

5、iblemolecularmechanismsofhemeoxygenase-1(rio一1)inductionbyquercetinusingmtprimaryhepatocytes．MethodsSpmgue-Dawleyratprimaryhepatocyteswereisolatedusingatwo-stepcollagenaseperfusiontechniqueandtreatedwithquercetinatvariousdosesr25—200rtmol／L)andtimes(2—12h)．

6、Toinvestigatetherolesofvarioussignalingpathways，thehepatocyteswerepre—treatedwith50tunol／Lquercetinplusanextmcellularsignal-regulatedkinase(ERK)inhibitor(PD98059at10~nol／L)，ap38inhibitor(SB203580at100tool／L)，ac-JunN-terminalkinaseinhibitor(SP600125at100tool

7、／L)oraphosphatidylinositol3-kinaseinhibitor(Wortmanninat1rtmol／L)for12h．ChangesinthemRNAandproteinlevelsofHO-1andnuclearfactor,ethryroid-2relatedfactor2(Nr￡Z)weredetectedbyRT-PCRandwesternblotting．ResultsAfter4-12hoftreatmentwithquercetinatallconcentrations

8、，theHO-1mRNAlevelinhepatoeyteshadincreasedsignificantly(vs．untreatedcontrolcells；allP<0．01)．Thequercetin-inducedHO-1expressionandNrt2translocationintothenucleoluswasinhibitedbyPD98059．ConclusionQuercet