新药研发中药物分析方法建立与验证.ppt

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1、新药研发中药物分析方法建立与验证袁艳娟2015.04.172021/8/142分析方法的设计依据分析方法建立的一般步骤分析方法验证的内容与要求药物分析应用示例内容提要2021/8/143第一节分析方法的设计依据建立分析检测方法的主要依据待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况分析测定的目的与要求生物样品的类型与预处理方法实验室条件2021/8/144一、待测药物的理化性质及体内存在状况准确测定生物样品中的药物或其特定代谢物——预处理——待测物从结合物或缀合物中释放选择样品预处理方法——首先应考虑——待测药物的理化性质——药物在生物体内的存在状况——药物在生物体内的生物转化

2、(代谢)途径2021/8/145(一)待测药物的理化性质药物的pKa值、亲脂性、溶解度、分配系数等——预处理及检测方法具有亲脂性——在适当的pH值下用溶剂萃取具有强极性或亲水性——沉淀蛋白、固相萃取、离子对萃取或衍生化后萃取等具有挥发性——GC测定法具有光谱或电化学特性——分析检测方法药物的稳定性——萃取浓缩技术对酸碱不稳定——避免使用强酸或强碱性溶剂对热不稳定——避免高温蒸发溶剂2021/8/146(二)待测药物的体内存在状态与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低——分离萃取方法蛋白结合较强——不宜直接采用溶剂萃取体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物——分析检测技术浓度

3、较低（尤其有代谢产物共存）——代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定——采用LC-MS等分析检测技术2021/8/147二、分析测定的目的与要求药代动力学——研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程——血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢产物要求——同时测定原形药物和代谢产物检测——宽线性范围(Cmax～Cmax的1/20)、高灵敏度(10-9g/ml)和高专属性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的分离)方法——不必强调方法的简便、快速；——大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS毒代动力学——确定新化合药物预期人用剂量水平与其毒性水平之间的安全范

4、围2021/8/148三、生物样品的类型与预处理方法生物样品的类型与预处理方法——决定分析方法的应用以血浆或血清为分析样品蛋白沉淀溶剂萃取——分析样品较为“干净”，可用HPLC或HPLC-MS检测2021/8/149四、实验室条件在设计体内药物分析方法时，还应充分考虑到实验室现有的或有可能在其它实验室使用的仪器装备，合理选择可行的分析方法。2021/8/1410第二节分析方法建立的一般步骤一、分析方法的选择二、分析方法的建立(一)检测条件的筛选(二)分离条件的筛选2021/8/1411一、分析方法的选择体内药物分析方法的设计生物样品中的药物浓度——决定分析方法的首要因素

5、生物样品中药物或其特定代谢产物的浓度低、样品量少——难以通过增加取样量提高方法灵敏度——通过选择适当的分析方法适应样品分析需求2021/8/1412二、分析方法的建立分析方法建立之前查阅文献资料——充分了解药物在体内的动力学过程，使所拟定的分析方法——避免受到代谢产物的干扰适用于实际生物样品测定2021/8/1413二、分析方法的建立初步拟定分析方法后进行一系列试验工作——选择最佳分析条件同时验证分析方法的可行性——确认是否适用于实际生物样品分析方法的建立和验证过程——是不可截然划分的分析方法的建立步骤第一步：检测条件的筛选第二步：分离条件的筛选2021/8/1414(一)

6、检测条件的筛选标准物质——照拟定的分析方法(不包括生物基质的预处理)测定——确定最佳分析检测条件(如色谱条件)和检测灵敏度HPLC——调整检测器(类型、条件)色谱柱(型号、牌号、填料性状与粒经、柱长度)流动相(组分及其配比)及其流速柱温、进样量、内标物质的浓度及其加入量等——使各物质具有足够的方法灵敏度(LOQ)良好的色谱参数(n、R、T)适当的保留时间(tR)2021/8/1415(二)分离条件的筛选在进行分离条件筛选时，应考察生物基质中的内源性物质及代谢产物对分离与检测的干扰，步骤如下：1．空白溶剂试验——溶剂(方法特异性)2．空白生物基质试验——endogenousc

7、ompounds(方法特异性)3．模拟生物样品试验——方法效能指标4．实际生物样品测试——代谢产物(方法特异性)2021/8/14162.空白生物基质试验空白生物基质(blankbiologicalmatrix)——如空白血浆考察目标——生物基质中内源性物质对测定的干扰（方法特异性）——在待测药物(或特定的活性代谢物、内标物质等)的“信号窗”（信号附近的有限范围）内不应出现内源性物质信号2021/8/14173.模拟生物样品试验模拟生物样品(质量控制,QC样品)——空白生物基质中加入待测药物考察目标——方法的线性范