体内药物分析方法的建立和验证ppt课件.ppt

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1、第四章体内药物分析方法的建立与验证1分析方法的设计依据分析方法建立的一般步骤分析方法验证的内容与要求体内药物分析应用示例本章内容提要第四章分析方法的建立与验证2第一节分析方法的设计依据建立分析检测方法的主要依据待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况分析测定的目的与要求生物样品的类型与预处理方法实验室条件第四章分析方法的建立与验证3一、待测药物的理化性质及体内存在状况准确测定生物样品中的药物或其特定代谢物——预处理——待测物从结合物或缀合物中释放选择样品预处理方法——首先应考虑——待测药物的理化性质——药物在生物体内的

2、存在状况——药物在生物体内的生物转化(代谢)途径第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据4(一)待测药物的理化性质药物的pKa值、亲脂性、溶解度、分配系数等——预处理及检测方法具有亲脂性——在适当的pH值下用溶剂萃取具有强极性或亲水性——沉淀蛋白、固相萃取、离子对萃取或衍生化后萃取等具有挥发性——GC测定法具有光谱或电化学特性——分析检测方法药物的稳定性——萃取浓缩技术对酸碱不稳定——避免使用强酸或强碱性溶剂对热不稳定——避免高温蒸发溶剂第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据5(二)待测药物的体内

3、存在状态与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低——分离萃取方法蛋白结合较强——不宜直接采用溶剂萃取体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物——分析检测技术浓度较低（尤其有代谢产物共存）——代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定——采用LC-MS、EIA等分析检测技术第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据6二、分析测定的目的与要求体内药物分析的目的——影响分析方法的应用药代动力学——研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程——血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢产物要求——同时测定原形药物和代谢产物检测—

4、—宽线性范围(Cmax～Cmax的1/20)、高灵敏度(10-9g/ml)和高专属性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的分离)方法——不必强调方法的简便、快速；——大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据7二、分析测定的目的与要求临床治疗药物监测有效治疗浓度范围内药物浓度方法——尽量简便、易行；适用于长期、批量样品的测定——大多采用UV、RIA或EIA等中毒患者的临床抢救药物浓度极高方法——不必强调方法的灵敏度，强调方法的特异性和分析速度——大

5、多采用色谱及其联用技术GC、GC-MS、RIA或EIA第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据8三、生物样品的类型与预处理方法生物样品的类型与预处理方法——决定分析方法的应用以血浆或血清为分析样品采用蛋白沉淀-溶剂萃取预处理技术——分析样品较为“干净”，可用HPLC检测用RIA分析——样品的预处理方法可较为粗放——经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测定第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据9四、实验室条件在设计体内药物分析方法时，还应充分考虑到实验室现有的或有可能在其它实验室使用的仪器装备

6、，合理选择可行的分析方法。第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据10第二节分析方法建立的一般步骤一、分析方法的选择二、分析方法的建立(一)检测条件的筛选(二)分离条件的筛选第四章分析方法的建立与验证11一、分析方法的选择体内药物分析方法的设计生物样品中的药物浓度——决定分析方法的首要因素生物样品中药物或其特定代谢产物的浓度低、样品量少——难以通过增加取样量提高方法灵敏度——通过选择适当的分析方法适应样品分析需求体内药物分析中常用分析方法——特点见表4-1第四章分析方法的建立与验证第二节分析方法的建立步骤1

7、2二、分析方法的建立分析方法建立之前查阅文献资料——充分了解药物在体内的动力学过程，使所拟定的分析方法——避免受到代谢产物的干扰适用于实际生物样品测定第四章分析方法的建立与验证第二节分析方法的建立步骤13二、分析方法的建立初步拟定分析方法后进行一系列试验工作——选择最佳分析条件同时验证分析方法的可行性——确认是否适用于实际生物样品分析方法的建立和验证过程——是不可截然划分的——为便于讨论而分别叙述分析方法的建立步骤第一步：检测条件的筛选第二步：分离条件的筛选第四章分析方法的建立与验证第二节分析方法的建立步骤14(一)检

8、测条件的筛选标准物质——照拟定的分析方法(不包括生物基质的预处理)测定——确定最佳分析检测条件(如色谱条件)和检测灵敏度HPLC——调整检测器(类型、条件)色谱柱(型号、牌号、填料性状与粒经、柱长度)流动相(组分及其配比)及其流速柱温、进样量、内标物质的浓度及其加入量等——使各物质具有足够的方法灵敏度(LOQ)良好的色谱参数(n、