辽西地区规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征抗体检测与分析-论文.pdf

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1、HeilongjiangAnimalScience72andVeterinaryMedicineNo092014辽西地区规漠化猪场牾繁殖与呼吸综含征抗体检测与分折郭伶(辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州121001)中图分类号：$852．659．7文献标识码：B文章编号：1004—7034(2014)09—0072—02猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)又称蓝耳病，曾于物全血，按照常规操作方法制备检测血清(要求血清1996年、2001年、2006年在我国出现3次暴发式大清亮，无溶血，血量充足)。流行，给养猪业造成了巨大的经济损失1]。由于引1．4．2试剂盒用前准备认真阅读产品使用

2、说明种的不规范及免疫程序的不合理，辽西部分地区的规书，所有试剂盒中试剂在2—8℃环境中保存。不用模化养殖场也有猪蓝耳病的发生和流行。研究采用的时候，务必将所有的板条用封口膜封住，放在封口ELISA检测法对采自辽西地区猪场的血样进行了塑料袋内，以防包被板被潮气损伤。尽管在生产使用检测。中包被的抗原是被灭活的，但仍被看作是病毒的潜在1材料与方法威胁，千万不要使底物接触光和氧化物等物质。不能1．1被检血清使用过期的成分或者把不同时间、不同批次的试剂混2012年3月份_2O13年4月份期问，采用耳静合在一起使用。整个检测过程中操作人员都要佩戴脉或前腔静脉采血的方式对辽西地区(葫芦岛

3、、北手套，因为使用的终止液是硫酸，有很强的腐蚀性，使镇、盘锦、义县、阜新、绥中、锦州太和区)6家规模化用时一定要小心，注意安全。养猪场的1200头生猪进行采血并分离血清，进行蓝试剂盒中的试剂，在操作前要恢复到常温状态。耳病的血清学检测(其中3个猪场免疫弱毒疫苗，1．4．3检测原理法国一LSI猪繁殖与呼吸综合征3个猪场免疫灭活疫苗)。抗体检测试剂盒的检测原理是在间接ELISA方法基1．2主要仪器础上建立起来的。特异的猪繁殖与呼吸综合征病毒TGL一20M台式高速冷冻离心机(湘仪离心机仪(PRRSV)被事先包被在准备好的96孔板上，在反应器有限公司生产)，TG16B台式高速离心机

4、(湖南凯进行的过程中，在待检场地采来的检测样本被加入到达仪器有限公司生产)，SHZ一82水浴恒温振荡器反应孔中，待检样本中的特异性抗体主动与孔中被事(金坛市天竞实验仪器厂)，HH一4数显恒温水浴锅先包被好的特异性抗原发生抗原抗体反应，这样在操(江苏金坛市亿通电子有限公司)，HS一840u超净工作过程中就不会被洗掉。之后加入底物，底物对氧化作台(浙江苏净净化有限公司)，LDZX一50KBS立式酶十分敏感。样本中所含的PRRSV抗体浓度会与显电热压力蒸气灭菌器(济南鑫贝西生物技术有限公色的颜色深浅形成正比。司)，DHG一9146A电热恒温鼓风干燥箱(上海万锐1．4．4洗涤液的配

5、制取9份灭菌水或者是去离子实验室设备有限公司)，AL204电子天平(上海沪粤水均可，加人一份清洗液(例如：配置200L的试验明科学仪器有限公司)，ELX800型酶标仪(北京中科用清洗液，向180L去离子水或者灭菌水内加入用科尔仪器有限公司)。20浓缩液)，已经配好的液体，最好在7d内1．3ELISA检测试剂盒用完。采用法国一LSI猪繁殖与呼吸综合征抗体检测1．4．5稀释液的配制将检测试剂盒内的稀释液用试剂盒(购自北京天之泰生物科技有限公司)。2倍量的纯化水或者去离子水进行稀释，配好的液体1．4检测方法在2d内用尽。1．4．1待测样品的配置无菌采取指定猪场受检动1．4．6样本

6、的准备阳性对照、阴性对照已经准备就绪，不需要再重新稀释，而操作所需要用的样本稀收稿日期：2014—02—12；修回日期：2014—03—12释液需要按要求进行200倍稀释。在准备好的作者简介：郭伶(1969一)，女，副教授，硕士，研究方向为预95L样本稀释液中加入5的样本，混合均匀，取防兽医学，jzmx~@126．con．5L加入ELISA反应孔中，最后加入45L的已配《黑龙江畜牧兽医》综合版2014年09月(下)73好的样本稀释液。表2辽西地区不同年龄段猪群蓝耳病血清学调查1．4．7ELISA检测操作步骤(参照ELISA检测试剂盒说明书)将所需要的试剂放在常温条件下，轻轻

7、摇动或者将试剂倒置过来摇匀。将待检样本和阴性对照液、阳性对照液放在板孔内，所取的阴性对照、阳性对照都需要两份进行操作，其他均按照ELISA检测试剂盒说明书完成。关研究结果较为相似，侯晓风对宁夏嘴山市猪蓝1．5结果判定耳病免疫效果进行了评估，结果显示没有进行免疫的试验成立条件：阳性对照的平均值OD。>0．6，猪群抗体阳性率平均为46．O％，弱毒疫苗免疫的猪并且阳性对照结果平均值／阴性对照结果平均群抗体阳性率平均为92．0％，经灭活苗免疫的猪群值>4．0。平均抗体阳性率为58．9％，弱毒苗免疫后猪群的抗结果用IRPC表