规模化猪场母猪猪瘟、猪繁殖障碍与呼吸综合征、猪圆环病毒病和猪伪狂犬病的病原及其抗体检测与分析.pdf

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1、《黑龙江畜牧兽医》科技版2014年05月(上)137勰囊化猪场母结猪瘟结繁殖潜碍与呼吸缘含征糟国环病毒病翱措伪狂犬病的扁原爱其抗体检潮与分析范俊娟(辽宁农业职业技术学院，辽宁营口115009)中图分类号：$852．659．6；$852．659．1文献标识码：B文章编号：1004—7034(2014)05—0137—04猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒进行提取。(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2．1．2RT—PCR反应体系：ssⅢ酶0．5L，5×(PCV一2)是导致猪繁殖障碍疾病的主要病原体，它Buf

2、fer2IxL，dNTP1．2L，二硫苏糖醇(DTI?)们均可以引起种猪的持续性感染，造成母猪的带毒综0．5txL，引物1L，RNA4．8L。反应条件：50oC合征，表现为繁殖障碍。母猪感染上述病毒后，可以1h；75℃5min。通过垂直传播和水平传播的方式将疾病传染给仔猪，2．1．3第1次PCR反应体系：Taq酶0．3，10×造成仔猪生长发育受到抑制，甚至死亡；并且它们均Buffer5txL，dNTP3IxL，ddH2O为32．7L，引物l为能引起猪的免疫抑制，造成免疫缺陷，机体免疫力下2IxL，引物2为2txL，cDNA5。反应

3、条件：94℃降，导致机体对其他病原体的易感性增强，接种疫苗7min；94oC18S，54℃17S，72oC15S，共3O个循后不易产生免疫应答，猪群抗体水平整齐度差，保护环；72℃5min。率降低。本研究应用RT—PCR和ELISA方法，对辽2．1．4第2次PCR反应体系：Taq酶0．3txL，10×宁鞍山某规模化养猪场20头母猪进行PRRS、CSF、Buffer5iLL，dNTP2IzL，ddH2O为38．7L，引物1为PR和猪圆环病毒病的病原及其抗体检测，并分析检1．5L，引物2为1．5L，模板1txL。反应条件：测结果，为猪

4、场疾病的综合防控措施提供一定理论94℃7min；94℃15s，54℃18s，72oC12S，共30个依据。循环；72℃20S。对第2次PCR产物进行琼脂糖凝l材料胶电泳，观察结果。1．1主要试剂2．2PRRSV的检测CSF、PRRS、猪圆环病毒病和PRgB蛋白和gE2．2．1PRRSV的提取按照RNA提取试剂盒说明蛋白ELISA抗体检测试剂盒，均购自武汉科前生物书进行提取。制品有限责任公司；RNA提取试剂盒，购自美国O．2．2．2RT—PCR反应体系：SSⅢ酶0．5L，5×MEGA公司；DNA提取试剂盒，购自北京康为世纪生Buff

5、er2L，dNTP1．2L，Drr0．5trL，弓I物1IxL，物科技有限公司；CSFV、PRRSV和PCV一2引物，均RNA4．8。反应条件：50℃1h；75℃5min。由宝生物工程(大连)有限公司合成。2．2．3PCR反应体系：Taq酶0．5iLL，10×Buffer1．2主要仪器2．5L，dNTP2txL，ddH2O为17L，弓I物1为1IxL，酶标仪、超纯水仪、梯度PCR仪、生物安全柜、高引物2为1iLL，cDNA1IxL。反应条件：94c【=2min；速冷冻离心机，由辽宁农业职业技术学院辽宁动物健94℃30s，57oC3

6、0s，72℃1min，共35个循环；康养殖研究中心提供。72℃5min。对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察2方法结果。2．1CSFV的检测2．3PCV一2的检测2．1．1CSFV的提取按照RNA提取试剂盒说明书2．3．1PCV一2的提取按照DNA提取试剂盒说明书进行提取。收稿日期：2013—06～28：修回日期：2014～02—162．3．2PCR反应体系：Taq酶0．5IxL，10×Buffer作者简介：范俊娟(1976一)，女，讲师，硕士，研究方向为兽医2．5lxL，dNTP2L，ddH2O为l7L，弓f物l为1txL，微生

7、物与免疫学和传染病学，fanjunjuan0902@sina，corn．引物2为1txL，cDNA1L。反应条件：94℃3min；《黑龙江畜牧兽医》科技版2014年05月(上)139清中PRgE蛋白均为阴性，说明没有PRV野毒感染。掣l03．5CSF抗体的检测(结果见表1和图4)CSF抗体阳性率为95％，抗体平均值为1．520,换算成血凝效价为1：256，离散度为60．40％。3．6PR抗体的检测(结果见表1和图5)ttiltli¨1Ⅲ_一t,litPRgB蛋白ELISA抗体检测结果表明，抗体阳性l23456789101ll2l3

8、l4l6l6l7l81g20PN率为95％，抗体平均值为0．560，离散度为28．14％。样品编号3．7PRRS抗体的检测(结果见表1和图6)PRRS抗体阳性率为90％，抗体平均值为1。920，图7猪圆环病毒病抗体的检测结果离散度为45．67％。3