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1、6中山医科大学学报(AcadJSUMS),2000,21(4S):6～9,59小鼠成肌细胞的培养纯化和鉴定方法王训,张成,刘焯霖,陈国俊(中山医科大学附属第一医院神经内科,广东广州510080)摘要:【目的】建立体外成肌细胞分离培养、纯化和鉴定方法。【方法】40只小鼠分10次采用分离消化法培养成肌细胞,分别用A、B、C、D4组不同培养液培养,以Ficoll梯度液纯化,进行Desmin免疫组化鉴定。【结果】成肌细胞培养后经台盼蓝检查成活率达95%以上,在接种后4～5d增殖达高峰,A、B、C3组培养液对成肌细胞的培养效果无差
2、异。Ficoll分离纯化的成肌细胞纯度较高,有97%的成肌细胞Desmin胞浆呈阳性反应。【结果】采用Ficoll纯化以国产血清培养,可获得高产量高纯度的成肌细胞。关键词:成肌细胞;细胞培养;纯化;免疫细胞化学中图分类号:R373.23文献标识码:A文章编号:1000-257X(2000)04S0-0006-04Identification,PurificationandCultureofMouseSkeletalMuscleCellWANGXun,ZHANGCheng,LIUZhuo-lin,CHENGuo-jun(D
3、epartmentofNeurology,FirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversityofMedicalSciences,Guangzhou510089,China)Abstract:【Objective】Toestablishapracticalmethodsoftheculture,purificationandidentificationofmousemyoblastsinvitro.【Methods】Musclesamplesof40miceweremincedandd
4、igestedwithtrypsin,cul-turedwithfourkindsofmedianamelyA,B,C,andD,finallypurifiedwithFicollgradientliquid.Myogenesisweredynamicallyobserved,myoblastweretestedbyDesminimmunohistochemistrystains.【Result】Themy-oblastcellviabilityisupto95%byTrypanblue,thecellprolifera
5、tionarrivedclimaxduring4～5dayafterplanted.ThereisnodifferencebetweenA,B,andCcultureliquid.Thecellpurityisupto97%byDesminim-munohistochemicalstainstest.【Conclusion】MyoblastscouldbepurifiedbyFicollandculturedwithDMEMcul-tureliquidcontainedserummadeinourcountry,inhi
6、ghquantity.Keywords:myoblast;cellculture;purification;immunocytochemistryDuchenne型肌营养不良症(Duchennemuscular纯度是原因之一,为此我们建立了成肌细胞分离培dystrophy,DMD)是一种以骨骼肌进行性变性、坏养和纯化方法,并对其生物学特征进行鉴定。死为主要病理特征的致死性的X-性连锁隐性遗传性肌病。由于肌细胞膜上的抗肌萎缩蛋白(dys-1材料与方法trophin)的缺乏或结构变异,引起肌细胞膜的形态和功能损害,致使肌纤维
7、变性坏死。临床缺乏有效1.1实验材料的治疗方法。近年来,成肌细胞移植治疗(myoblastD-Hanks液:自备。DMEM培养基:Gibco-transfertherapy,MTT)DMD在实验和临床研究已BRL公司提供。胎牛血清:Gibco-BRL公司、浙江取得一定进展,是目前唯一能将人类自然基因组完杭州四季青生物制品公司提供。胰蛋白酶和胶原[1]整转移的方式。文献报道MTT实验失败的原酶:Sigma公司提供。青、链霉素:国产。Ficoll-[2]因很多,其中体外培养的成肌细胞的融合能力和400:Pharmacia公司
8、提供。结蛋白(desmin)抗体:收稿日期:2000-03-16基金项目:国家自然科学基金资助项目(39870804);广东省自然科学基金资助项目(970061);卫生部临床学科重点攻关项目(97040229)作者简介:王训(1966-),男,安徽合肥人,博士生,主治医师,讲师.第4S期王训,等.小鼠成肌细胞的培养纯
