香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt／β-catenin信号途径的机制研究.pdf

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1、中国癌症亲志2014年第24卷第12期CHINAONCOLOGY20l4Vo1．24No．12881香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt／[3-catenin信号途径的机制研究李冬万海英姚懿雯吴军录权文强周宏张宇同济大学附属同济医院检验科，上海200065[摘要]背景与目的：香烟烟雾诱导的炎性反应可显著促进肺肿瘤的生长，本研究通过体内外实验明确香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt／~一catenin信号途径的机制。方法：利用尾静脉注射鼠Lewis肺癌细胞方法建立小鼠肺癌模型，然后采用香烟烟雾对其进行刺激，诱发炎性反应。免疫组化方法检测小鼠和人肺肿瘤组织中CD68、肿瘤坏死因

2、子0【(tumornecrosiSfactoralpha，TNF—a)和无磷酸化p—catenin的表达。采用Transwell插入式细胞培养皿共培养人巨噬细胞和人肺癌细胞株A549细胞。采用蛋白质印迹法(Westernblot)检~A549细胞中无磷酸化p—catenin的表达及磷酸化的GSK一3B和Akt蛋白的表达。结果：免疫组化结果显示，香烟烟雾刺激肺肿瘤负荷小鼠后，其肿瘤组织中巨噬细胞CD68、TNF一0【和无磷酸化~-catenin的表达均明显高于对照组。肺癌患者肿瘤组织中，CD68和TNF—的阳性表达均明显高于正常组织。肺腺癌和鳞癌的无磷酸化

3、~-catenin的染色阳性率分别为68．9％和62．2％，其阳性率与患者吸烟与否及肿瘤分期有关，差异有统计学意义均<0．05)，并且CD68的细胞数在无磷酸化B—catenin染色阳性的标本中显著升高<0．01)。Westernblot检测结果显示，不同浓度香烟抽提物(cigarettesmokeextract，CSE)刺激共培养细胞后，A549细胞中无磷酸化~-catenin的表达随着CSE浓度的增加而显著上升。在加入TNF一0【中和抗体后，A549细胞中无磷酸化B—catenin的表达被抑制。用TNF—a处理A549细胞后，磷酸化的GSK一3p和A

4、kt蛋白在2h后表达增加，4h后无磷酸化~-catenin蛋白表达也开始上调。结论：香烟烟雾诱导肺肿瘤组织中巨噬细胞释放炎性反应因子TNF-a，进而通过Akt／GSK一3B途径激活肿瘤细胞中wnt邝一catenin信号通路。[关键词]巨噬细胞；肺癌；肿瘤坏死因子U；Wnt／~一catenin信号通路DOI：10．3969~．issn．1007-3969．2014．12．001中图分类号：R734．2文献标志码：A文章编号：1007—3639(2014)12—0881-08ThestudyonmechanismsofWnt／ll-cateninsignal

5、ingactivationbysmokefromcigaretteinlungcancercellLIDong，WANHai-ying，YAOYi—wen，WUJun—lu，QUANW_en—qiang，ZHOUHong，ZHANGYu(DepartmentofClinicalLaboratory,Ton~iHospital，TongjiUniversity,Shanghai200065，China)Correspondenceto：LIDungE—mail：1861d@163．com[Abstract]Backgroundandpurpose：Ciga

6、rettesmoke-inducedinflammatoryresponseremarkablypromoteslungtUlTIOrgrowth．ThisstudyaimedtoelucidatethemechanismofWnt／13一cateninsignalingactivationbycigarettesmokeinlungcancercells．Methods：Tounderstandtheeffectofcigarettesmokeonmice，akindofmetastaticlungcancermousemodelwhichwasest

7、ablishedbyintravenousinjectionofLewislungcarcinomacells．Byimmunohistochemicalanalysis，weanalyzedtheexpressionofCD68(macrophagemarker)，TNF-aandunphosphorylated13-catenininmiceandhumanlungcancersamples．TocoeulturehumanlungadenocarcinomacelllineA549cellswithmacrophages．the“Transwell

8、Inserts”systemwasusedincoculturingmode1．