碳二亚胺法制备阿莫西林人工抗原及其鉴定.pdf

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1、河南农业科学，2012，41(3)：142—145JournalofHenanAgriculturalSciences碳二亚胺法制备阿莫西林人工抗原及其鉴定刘庆堂，王磊，职爱民，滕蔓1，胡骁飞，孙亚宁，宋春美。，王寅彪，张改平(1．河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室／河南省动物免疫学重点实验室，河南郑州450002；2．河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳471003；3．江南大学食品学院，江苏无锡214122)摘要：合成、鉴定了阿莫西林(amoxicillin，AMO)人工抗原，并通过动物免疫法生产了亲和

2、力高、特异性好的鼠源AMO多克隆抗血清。采用碳二亚胺(EDC)法将AMo分别与载体蛋白BSA和OVA偶联，合成完全免疫抗原AMO—BSA和检测抗原AMo—OVA，经紫外分光光度法和SDS—PAGE以及动物免疫进行鉴定。结果表明，偶联后的紫外吸收峰与BSA和AMO相比都发生了一定的位移，AMO—BSA在276nm处出现最大吸收峰，BSA的泳动速度大于AMO—BSA。免疫后获得的3只小鼠多抗血清，通过间接竞争ELISA测定，效价可达1×10以上，1号小鼠半数抑制浓度(IC。)为573．75ng／mI，敏感性较好。AMO完全

3、人工抗原的合成以及鼠源多克隆抗体血清的制备，为AMO单克隆抗体的制备奠定了基础。关键词：阿莫西林；人工抗原；合成；多克隆抗体；碳二亚胺法中图分类号：$816．7文献标志码：A文章编号：1004—3268(2012)03—0142—04PreparationandIdentificationofAmoxicillinArtificialAntigenbyEDCMethodLIUQing—tang，WANGLei。，ZHIAi—min，TENGMan，HUXiao—fei，SUNYa—ning～，SONGChun—mei，

4、WANGYin—biao，ZHANGGai—ping(1．KeyLaboratoryforAnimalImmunologyoftheMinistryofAgriculture，HenanProyincialKeyLaboratoryofAnimalImmunology，HenanAcademyofAgriculturalSciences，Zhengzhou450002，China；2．FoodandHioengineeringCollege，HenanUniversityofScienceandTechnology，L

5、uoyang471003，China；3．TheSchoolofFoodScienceandTechnology，JiangnanUniversity。Wuxi214122，China)Abstract：TosynthesizetheartificialantigenofAMOandobtainitsmousepolyclonalantiserum，theimmunogenAMO——BSAandcoatingantigenAMO—OVAweresynthesizedusingEDCmethodandidentified

6、byultravioletscanningandSDS—PAGE．BAIB／CmicewereimmunizedwiththesynthesizedantigensandthepolyclonalantiserumwasdeterminedbyindirectandblockingELISA．Theresultsshowedthatafterconugation，theultravioletabs0rptionpeakofAM()一BSAappearedat276nm，indicatingthatcertaindisp

7、lacementoccurredcomparingwiththeultravioletabsorptionpeaksofbothAMOandBSA．Thee1ectroDhareticmobilityofBSAwasobservedbig—gerthanthatofAMO—BSA．IndirectELISAshowedthattheantiserumt~tresofal1thethreeim—munizedBAIB／cmicewereabove1×1O．WiththeIC50of573．75ng／mL，NO．1mous

8、epoly—clonalantiserumshowedthebestsensitivity．Inthisstudy，AMO—BSAandAMO—OVAweresue—cessfullysynthesizedandhighsensitivepolyclonalantiserumsagainstAMOwereprepared，whic