水稻蜡质基因OsCER4的原核表达及多克隆抗体制备.pdf

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1、第25卷第1期仲恺农业工程学院学报Vo1．25，No．12012年3月JournalofZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineeringMarch，2012水稻蜡质基因OsCER4的原核表达及多克隆抗体制备周玲艳，秦华明。，周海，杨家伟，庄楚雄(1．仲恺农业工程学院生命科学学院，广东广州510225；2．华南农业大学生命科学学院，广东广州510642；3．暨南大学W-Y-学院，广东广州，510564)摘要：利用PCR方法扩增水稻(OryzasativaL．)蜡质基因OsCER4的开放阅读框

2、(Openreadingframe，ORF)，并克隆到原核表达载体pET-23d上，将表达载体OsCER4-pET转入大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)菌株，以1．2mmol／L的异丙基一p—D一硫代吡喃半乳糖苷(IsopropylB—D·thiogalactoside，IPTG)诱导表达融合蛋白，然后以融合蛋白作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体．SDS-PAGE电泳分析结果表明，成功诱导表达了分子量约为71．6kD的融合蛋白，而Westernblot检测表明，免疫家兔的抗血清与水稻幼苗总蛋白杂交信号较好．

3、0s．CER4抗体的制备有助于研究OsCER4基因的表达特性．关键词：水稻(OryzasativaL．)；OsCER4基因；原核表达；多克隆抗体中图分类号：Q511文献标识码：A文章编号：1674—5663(2012)O1—0011—04ProkaryoticexpressionandpolyclonalantibodypreparationofwaxgeneOsCER4inriceZHOULing—yan'，QINHua—ming，ZHOUHai，YANGJia—wei，ZHUANGChu．xiong(1．Collegeofli

4、fesciences，ZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineering，Guangzhou510225，China；2．Collegeoflifesciences，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China；3．CollegeofScienceandTechnology，JinanUniversity，Guangzhou，510632，China)Abstract：TheORFofOsCER4geneinricewasobt

5、ainedbyPCRandclonedintotheprokaryotieexpres—sionvectorpET-23d，thentheresuhingrecombinantvectorwasintroducedintoEscherichiacolistrainBL21(DE3)andinducedtoexpresstheOsCER4fusionproteinby1．2mmol／Lisopropyl-B-D—thiogal-actoside(IPTG)．TheOsCER4fusionproteinwasusedasantigen

6、toimmunerabbits．Theresultsshowedthattheproteinof71．6kDwasexpressedsuccessfullybyinductionwithIPTGandthepolyclonalantibodieswereobtainedbyusingOsCER4fusionproteinasantigentoimmunerabbitsandtheimmuno—logicalspecificityofthepolyclonalantibodytoOsCER4wasconfirmedbyWestern

7、blotanalysis．ThepreparationofOsCER4antibodieswascontributedtodetecttheexpressionpatternofOsCER4geneinrice．Keywords：rice(OryzasativaL．)；OsCER4gene；prokaryotieexpression；polyclonalantibody植物表皮蜡质是覆盖在植物最外层的一类有机害和防止某些昆虫的蚕食等功能J．混合物的总称，它是植物自我防护的最后一道屏OsCER4与拟南芥(Arabidopsistha

8、liana)CER1障，在植物生长发育过程中起重要作用．一般认为和水稻(OryzasativaL．)Wda!基因的同源性较表皮蜡质具有阻止植物组织内水分的非气孔性散高．CER1基因主要在茎、花和果实中表达，CER1失_l、防止植物被有害光线损伤、维