水稻SDG723蛋白C末端原核表达及多克隆抗体制备.pdf

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1、广东农业科学2012年第21期l51水稻SDG723蛋白C末端原核表达及多克隆抗体制备林欣欣，张志刚，李超，梁杰文’，杜平州，王玉琪，(1．华南农业大学生命科学学院，广东广州510642；2．广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室，广东广州510642)摘要：水稻SDG723蛋白含有植物组蛋白甲基转移酶保守的SET结构域。选取其抗原决定簇较密集的C末端进行原核表达，通过构建原核表达载体pET28a一723C，转化EcoliBL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达融合蛋白后进行纯化。以纯化的融合蛋白为抗原免疫新西

2、兰白兔，制备多克隆抗体。Western—blot分析表明，制备的多克隆抗体能有效地检测抗原的表达，为进一步深入研究SDG723蛋白的功能奠定了基础关键词：水稻；SDG723；原核表达：多克隆抗体中图分类号：Q785文献标识码：A文章编号：1004—874X(2012)21-0151—03ProkaryoticexpressionandpreparationofpolyclonalantibodyofSDG723CterminalfromriceLINXin—xin，ZHANGZhi—gang，LIChao，LIANGJ

3、ie-wen，DUPing-zhou，WANGYu-qi，(1．CollegeofLifeSciences，SouthChinaAgricultura!University,Guongzhou510642，China；2．GuangdongProvincialKeyLaboratoryofProteinFunctionandRegulationinAgriculturalOrganisms，Guangzhou510642，China)Abstract：RiceSDG723containedSETdomain，which

4、wasconservedinplanthistonemethyltransferase．Inthisstudies，theprokaryoticexpressionvectorofSDG723CterminalfpET28a一723C1wasconstructed，andtherecombinantplasmidwastransformedintoEcolBI21fDE31andtheexpressionofrecombinantproteinwasinducedbyIG．Atierpurification，itwas

5、usedastheantigentoimmunearabbitandthenpolyclonalantibodywasobtained．Western—blotanalysisconfirmedthatthepolyclonalantibodywasabletorecognizetheantigen．whichwasexpressedinE．coli．ThisworklaidafoundationforfunctionalstudiesofSDG723．Keywords：rice；SDG723；prokaryotice

6、xpression；polyclonalantibody由组蛋白甲基转移酶(HistoneMethyhransferase，白进行Western—blot检测，结果表明该抗体的特异性很强，HMT)催化的组蛋白甲基化修饰是一种重要的表观遗传调为进一步研究SDG723蛋白的功能奠定了基础。控机制。目前已经在植物中发现了多种催化不同组蛋白赖1材料与方法氨酸甲基化的酶，它们均含有在进化上非常保守的由约130个氨基酸形成的SETfSu(var)3—9，Enhancerofzeste，1．1试验材料Trithorax]结构域，从而

7、构成了SET结构域蛋白家族(SET限制性内切酶、T4DNA连接酶、TaqDNA聚合酶、DomainGroup．SDG)[”。根据不同植物中含有SET结构域蛋dNTPMixture、pET28a载体试剂盒等购自TaKaRa公司；白的N端及C端特点，可将SDG家族蛋白分为7类圜。水DNAMarker、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒等购自广州英稻SDG723(0srX1)属于家族Ⅲ(Trithorax家族)，该家族蛋韦创津生物科技有限公司；PCR引物合成和序列测定由白具有H3K4甲基转移酶的活性。在拟南芥中，Trithorax家

8、北京奥科鼎盛生物技术有限责任公司完成；弗氏完全佐族的成员有ATX(ArabidopsisTrithorax)和ATXR(Arabid—剂、弗氏不完全佐剂、氨苄青霉素、碱性磷酸酶标记的羊抗opsisTrithoraxRelated)。拟南芥中ATX1的缺失突变(atx1)兔二抗为Sigma公司产品；Ni—NTAHis结合树脂为会导致