2011高三生物一轮复习精品课件：选修1 专题 2 微生物的培养与应用.ppt

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1、(1)微生物的分离与培养(2)某种微生物数量的测定(3)培养基对微生物的选择作用(4)利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用(1)培养基的种类、营养要求及配制原则(2)无菌技术的内容及方法(3)分离纯化微生物的研究思路、方法一、微生物的实验室培养1．培养基的营养构成营养物质定义作用主要来源碳源能提供碳元素的物质构成生物体的物质，异养生物的能源物质无机物：CO2、NaHCO3有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等营养物质定义作用主要来源氮源能提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物无机物：N2、NH3、氨盐、硝酸盐

2、有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长不可缺少的微量有机物酶和核酸的成分维生素、氨基酸、碱基等(1)微生物最常利用的碳源是糖类(特别是葡萄糖)，常利用的氮源是氨盐、硝酸盐。(2)在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源。(3)微生物之所以需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。2．大肠杆菌的纯化大肠杆菌的纯化培养，包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段。(1)培养基的配制流程(以牛肉膏蛋白胨培养基为例)①计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制100mL的培养基时，各种成分的用量。②称量：准确地称取

3、各种成分。③溶化：先将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。然后往烧杯中加入蛋白胨和氯化钠，最后加入琼脂，加热使其熔化。在此过程中不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。当琼脂完全熔化后，补加蒸馏水至100mL。④灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中加棉塞包好，放入高压灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃条件下，灭菌15～30min。将培养皿包好后放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。⑤倒平板：等培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。(2

4、)纯化大肠杆菌①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。(3)培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基(对照组)都放入37℃恒温箱中，培养12h和24h后，分别观察并记录结果。3．无菌技术(1)消

5、毒和灭菌的区别条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好，原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。(2)无菌技术主要操作要求①实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所有器具和培养基灭菌。②实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材

6、料再次污染。二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．选择合适的培养基(1)根据培养基的用途可分为选择培养基和鉴别培养基培养基种类特点用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；用尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌)(2)分离分解尿素的细菌的培养基即为选择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。培养基种类特点用途鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴

7、别不同种类的微生物，如可用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)2．统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计一定容积的样品中微生物数量。②方法：用计数板计数。③缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b．为了保证结果准确，一般选择

8、菌落数在30～300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。3．细菌分离与