奶牛孕酮酶联免疫检测试剂盒的研制.pdf

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1、广西农业科学2010．41(4)：386—389GuangxiAgiculturalSciences奶牛孕酮酶联免疫检测试剂盒的研制庞观龙，何达崇，温和心(1广西农业职业技术学院，南宁530007；2广西科学院生物研究所，南宁530003)摘要：为了掌握母牛孕酮水平变化信息，为发情鉴定、妊娠鉴别和卵巢疾病诊断提供参考依据，根据ELISA基本原理，研制了奶牛孕酮ELISA检测试剂盒。结果表明，采用孕酮一牛血清白蛋白(P4一BSA)交联物解决了在酶标板上包被抗原的问题，且抗原容易保存；而利用孕酮一卵清白蛋白(P4-OVA)交联物免疫兔子获得高效价抗体，能阻断1n咖L孕酮水平；并以E

2、LISA棋盘测定法确定P4-BSA2000~、血清50O倍稀释为该试剂盒最佳工作浓度。该试剂盒以牛粪作为检测样品，即通过粪便中的孕酮水平变化可为奶牛发情鉴定、妊娠鉴别、繁殖障碍性疾病诊断提供可靠的技术支撑。关键词：奶牛；孕酮；酶联免疫吸附测定法；抗体效价中图分类号：$854．43文献标识码：A文章编号：1002—8161(2010)04—0386—04PreparationofenzymelinkedimmunosorbentassaykitformilkCOWprogesteronePANGGuan-long，HEDa-chong，WENHe-xin(1GuangxiVoca

3、tion~TechnicalCollegeofAgriculture，Nanning530007，China；2BiologyInstitute，GuangxiAcademyofSciences，Nanning530003，China)Abstract：InordertoinvestigatethechangeinprogesteronelevelofCOWtoprovidereferenceonheatandgestationperiodidentification，andovarydiseasediagnosis，theenzymelinkedimmunosorbentas

4、saykit(ELISA)forCOWprogesteronewaspreparedbasedonprimarymechanismofELISA．Theresultsshowedthatapplyingprogesteronebovinescramalbumin(P4-BSA)cross-linkingpolymercouldsolvetheproblemofenvelopingantigenonELISAplate，andantigenwaseasytobeconserved．Itwasfoundthathightiterantibodycouldbeobtainedbyap

5、plyingprogesterone—ovalbumi一OVA)cross—linkingpolymertoimmunizetherabitanditcouldblock1ng／mLprogesterone．The2000and500dilutiontimesforL-BSAandsenlmweref0undtobetheoptimalconcentrationofkitbyELISAchessboardmethod．TheCOWdungwasusedfordetectingsamplewithkit，andthechangeinprogesteronelevelofdungc

6、ouldprovidereferenceonheatandgestationperiodidentification，anddiagnosisofreproductionbarrierdisease．Keywords：cow；progesterone；ELISA；antibodytiter雌性动物性周期中孕酮水平呈规律性变化．发有快速、灵敏、简便等优点，目前已被广泛应用于多情期孕酮水平最低，黄体期孕酮水平较高，妊娠期种细菌、病毒疾病的诊断。本研究根据EUSA基孕酮水平则一直维持在较高水平上，即孕酮水平与本原理。研制奶牛孕酮ELISA检测试剂盒，旨在获得发情周期、妊娠等高度相关。

7、在雌性动物血液、乳汁母牛孕酮水平变化信息，为发情鉴定、妊娠鉴别和及粪便中均含有微量的孕酮，一般化学方法无法检卵巢疾病诊断提供参考依据。测。传统的孕酮检测方法是采用放射免疫方法1材料与方法(RIA)]，该方法具有较高灵敏度，但测定费时、所需设备特殊、价格昂贵，且放射物处理不好还会污1．1主要试剂及仪器染环境，因此，不适宜在生产中推广使用。酶联免疫主要试剂有孕酮标准品(购自Sigma公司)、羟吸附测定法(ELISA)是将已知的抗原或抗体吸附在基孕酮、牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、