绵羊子宫内膜上皮细胞的纯化培养与鉴定.pdf

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1、中国摩擘c童攉2015，31(11)：63—67ChineseAgriculturalScienceBulletin绵羊子宫内膜上皮细胞的纯化培养与鉴定马欣，邢书涵，刘云海，郭勇，倪和民(北京农学院动物科学技术学院，北京102206)摘要：为了探索一种分离纯化绵羊子宫内膜上皮细胞的简便高效方法，采用先组织块培养后消化纯化和直接消化后过筛纯化2种方法对绵羊子宫内膜上皮细胞进行培养、纯化，最后用免疫荧光染色方法对上述方法得到的细胞进行角蛋白检测从而鉴定上皮细胞纯度。结果表明：先组织块培养后消化纯化法可以得到纯度95％，且形态均一、活性良好的绵羊子宫内膜上皮细胞；先消

2、化后过筛纯化法得到的子宫内膜上皮细胞形态良好但是纯度仅为70％，与前一方法相比有待提高。因此，先组织块培养后消化纯化法是获得绵羊子宫内膜上皮细胞的一种简单易行且高效的方法，该方法得到的细胞可以在体外传至3～4代。关键词：绵羊；子宫内膜上皮细胞；纯化中图分类号：$814．8文献标志码：B论文编号：casb14120034Cultivation，PurificationandCharacterizationofOvineEndometrialEpitheHalCellsMaXin，XingShuhan，LiuYunhai，GuoYong，NiHemin(Colleg

3、eofAnimalScienceandTechnology,BengUniversityofAgricuhure，Beijing102206)Abstract：Theobjectiveofthisstudywastoinvestigateasimpleandefficientwaytoobtainpurerovineendometrialepithelialcellsculturedinvitro．Twomethods，whichweretrypsindigestionfollowingtissueculturingandfiltrationmethodfoll

4、owingcollagenasedigestion，wereappliedtocultivateandpurifyovineendometfialepithelialcells．Then，eytokeratinwasdetectedwithimmunocytochemicalstainingtoevaluatethepurityofovineendometrialepithelialcellscollectedbythetwodiferentways．Theresultsshowedthathi【ghpurity(>95％)ofepithelialcellswh

5、ichexhibitedhomogeneousmorphologyandgoodcellactivitycouldbeobtainedusingtrypsindigestionfollowingtissueculturing．However，purityofepithelialcells(about70％)waslowerusingfiltrationmethodfollowingcoHagenasedigestioneventhoughthemorphologyofcellswassimilartothatofformerone．Therefore，itcou

6、ldbeconcludedthattrypsindigestionfollowingtissueculturingwasasimpleandeficientwaytopurifyovineendometrialepithelialcellswhichcouldbepassagedforatleast3-4generationswhenculturedinvitro．Keywords：sheep；endometrialepithelialcells；purified0引言究中占重要地位1。在胚胎与母体“对话”的过程中，子宫是孕育胎儿的器官，作为卵巢激素作用的靶子宫

7、内膜上皮细胞充当了极其重要的角色【。Spencer组织，子宫内膜与胚胎附植密切相关，在生殖生理的研等脚及Johnson等等发现在绵羊怀孕期间通过卵巢分基金项目：2013年度北京市教委北京市属高等学校创新团队建设与教师职业发展计划项目“体细胞转基因克隆肉牛新品系培育与利用”feXM2013014207_000067)：2013年度国家自然基金面上项目“牛体内外植入前胚胎IFNT的差异表达及对子宫上皮细胞ISG15和Wnt7a表达的体外诱导”(31272526)。第一作者简介：马欣，女，1988年出生，北京人，硕士研究生，研究方向：动物产科及胚胎工程。通信地址：10

8、2206北京昌平区回龙观