禽流感、新城疫血凝抑制试验探讨.pdf

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1、福建畜牧兽医第33卷第3期20l1年31禽流感、新城疫血凝抑制试验探讨王湘珩厦门市同安区动物卫生监督所361100文献标识码：A文章编号：1003—4331(2011)03—0031—02血凝抑制试验是现在动物卫生监督部门作为掌血管【3]。(2)因为要采较多的血量，所以应注意在每握禽群禽流感、新城疫抗体水平的有力方法，为提高羽鸡采血后都要用干棉花压迫止血30s，以免采血兽医疫病防控部门对养殖场以及养禽散户禽流感、口有肿包产生，影响卖相，避免造成养殖户的经济损新城疫抗体水平的监控力度有至关重要的作用。笔失及对家禽伤害过大。(3)每个样品都要编号。者就从事禽流感、新城疫抗体

2、检测所积累的一些经3)被检血清，应保证无溶血、无污染，保存于验，与大家共同探讨。4℃，15d内检查。如果血清待检超过15d，需要低1红细胞的准备温冰冻保存。还要注意被检血清冻结或受热，以免影1)采集3～4羽无禽流感抗体的成年公鸡血。可响凝集价f2J。根据笔者的经验，检测的血清若遇到胶以购买市场上3～4月龄的公鸡自己养．待鸡只机体冻样，可以放在水浴锅(60℃)快速化冻，然后迅速无抗体且成年后采其静脉血备用。这样的鸡血可以吸取所需的检测液量(25uL)进行检测。也要注意血用pH7．2、0．01mol／LPBS或0．9％氯化钠注射液清在加温或保存过程中一旦出现沉淀，也容易引起

3、(250mL含氯化钠2．25g)洗3次，每次1000r／rain非特异性凝集翻。离心10min。配成1％红细胞悬液。4)检测完的血清可放于4qC冷藏，也可一20℃2)若采用免疫公鸡的血，则要充分洗去血清和冷冻(若实验室条件限制也可置于一4O℃冷冻)。以其他杂质，一般洗7～8次，配成l％红细胞悬液，4℃备日后复查．但是一般情况下复查意义不大。保存3d，时间再长会溶血，最好现配现用[1】。3检测试剂的准备3)红细胞变色、污染、溶血和发臭都不得使用。禽流感病毒H5亚型HI试验抗原、禽流感病毒同批试验应使用同批次红细胞翻。H5亚型阳性血清、鸡新城疫血凝抑制试验抗原2血清的制备(

4、3种试剂均选择哈尔滨维科生物技术开发公司产1)作为企业的日常监测，可以采用塑料管(将一品)：稀释液。次性静脉注射器减成5～6em，这种长度是为了让封3．1抗原的保存使用切记按照说明书要求的条件口与所封装血液有足够距离。封口时因为温度烧得保存，避免反复多次冻融影响试验结果。抗原开启过高会破坏血液)引流采血，对鸡只损伤小。需要注后，置4℃冷藏。意的是：(1)采血时尽量不要选择病弱禽。(2)要做到3．2稀释液体的配制现在一般有2种方案：一种一羽鸡用一根针、一根管，血量最好能大于1．5cm。是按国家标准配制的pH7．2、0,01mol／LPBS；一种以免血清量过少或夹带红血球造

5、成检测结果不准是0．9％氯化钠注射液(250mL含氯化钠2．25g)。笔确。(3)塑料管两端一定要烧熔封好，以免血清在送者将2个批号的禽流感病毒抗原和1个批号的鸡新样过程和离心过程中漏出。城疫抗原与3种不同稀释液进行试验，结果见表l。2)作为防疫部门检测养殖场、散户或活禽交易用3种稀释液检验H5的抗原效价，检测的结市场出售禽只的免疫情况，可以采用注射器(2mL果还是比较一致的。而检验新城疫抗原效价有一定或5mL的针头)采完血后将全血打人干净的离心的不一致。用NaC1和pH6．9PBS检测H5抗原效价管。需要注意的是：(1)正确采血。可以对家禽尽量采时都可以判读到2m，但

6、两者在2时结果更加清晰、用翅内侧腋下静脉采血法。采血者在保定好禽只后干净，即两者在判定结果时会出现模棱两可状态；同左手拨开左侧翅内侧静脉上的羽毛，使静脉暴露，消时发现用pH7．2PBS作稀释液所检测的最高凝集价毒后右手持注射器与皮肤呈45度角方向进针，持针(出现可判读的以最干净的判定结果为最高凝集价)时手要稳，进针不宜过深，如刺穿血管，则很快引起与其后孔的不完全凝集价孔的层次非常分明。用皮下血肿，导致采血失败。一旦刺入皮肤，即可回抽pH6．9PBS稀释液比用NaC1判定的效价清晰度更活塞，使管内形成负压。这样能够准确判定是否进入高。用3种稀释液与3种抗原配成的工作抗原，

7、发现32福建畜牧兽医第33卷第3期2011年均在第2孔出现完全凝集的最高效价。笔者在做抗抗原回归试验成立的工作抗原作为反应抗原)。其中原回归试验的过程中发现NaC1第3孔的凝集效果工作抗原与待检血清的感作时间为30rain，加入最好。1％红细胞悬液后的感作时间为40min。表1不同稀释液与不同抗原的HA试验稀释液感作时间(rain)抗体滴度工作抗原与待检血清加入l％红细胞悬液2009112010073．3工作抗原在同样的稀释液中，感作时间不足，效价偏低。1)检测抗体的滴度。一定要在工作抗原回归完同一感作时间、不同的稀释液，测得的抗体滴度还