鸡新城疫血凝和血凝抑制实验.ppt

《鸡新城疫血凝和血凝抑制实验.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价目的1、掌握鸡新城疫的临诊要点。2、了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。内容1、鸡新城疫的临诊要点。2、鸡新城疫的实验室诊断。NDV的分离及鉴定；NDV毒力的鉴定3、鸡新城疫的免疫效果评价鸡新城疫的免疫监测血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)血凝试验（HA）和血凝抑制试验(HI)HA和HI的原理⒈HA试验：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞表面受体结合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象。2.HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑

2、制，称HI试验。一、鸡新城疫的血凝试验(HA)【材料】新城疫病毒鸡胚接种尿囊液1份0.5％鸡血球悬液1管生理盐水或PBS1瓶96孔微量血清盘1块微量加样器1支一、鸡新城疫的血凝试验(HA)【方法与步骤】（一）制备鸡红细胞悬液：1.用注射器抽取抗凝剂。2.用上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡的静脉血。3.混匀，加生理盐水适量，洗涤离心，共离心三次（第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分5分钟）洗去血清及白细胞。⒋取纯红细胞0.6ml，加生理盐水稀释99.4ml，即成1%的鸡红细胞悬液。一、鸡新

3、城疫的血凝试验(HA)（二）加样1.在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50L生理盐水。2.于左侧第1孔加50L病毒液，混合均匀后，吸50L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50L；第12孔为红细胞对照。3.自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50L，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果。一、鸡新城疫的血凝试验(HA)【病毒血凝试验的操作方法（单位：L）】孔号123456789101112病毒稀释度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:

4、2048对照生理盐水505050505050505050505050病毒液50505050505050505050500.6%红细胞505050505050505050505050微型振荡器1min，静置30min弃50结果观察+++++++++++++++++++++++++++++++++--以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位一、鸡新城疫的血凝试验(HA)【结果判定】置于振荡器上振荡1分钟，静置后30min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔

5、底，平铺呈网状，即为100%凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)【材料】除血球凝集试验所用材料外，血清取鸡免疫血清。鸡群卵黄抗体的制备1.取鸡蛋卵黄20ml，加入等量生理盐水，振荡，摇匀。2.加入等量氯仿40ml，振荡

6、30分钟。3.取振荡的卵黄液3000～4000rpm30分钟。4.取上清液作为抗体检测材料二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)【方法】1.根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。2.在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，先在第1孔加50L生理盐水。3.自第3孔至12孔各加50L4个血凝单位的新城疫病毒液。4.第１孔加被检鸡血清50L，吹吸混合均匀，吸50L至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50L，稀释度分别为：1:２、1:4、1:8……；第12孔加新城疫阳性血清

7、50L，作为血清对照。振荡混合均匀，置室温中作用20min。5.自第l孔至12孔各加0.5%鸡红细胞悬液50L，振荡混合均匀，室温下静置30-40min后观察结果二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)孔号滴度lg2材料12345678910111212345678910病毒对照对照8单位病毒504单位病毒50505050505050505050生理盐水50被检鸡血清50505050505050505050弃500.6%红细胞505050505050505050505050震荡混匀，室温30-40min结果观察-

8、-----++++++++++++++++++【病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：L）】以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)【结果判定】以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者，该病毒为新城疫病毒。从表4-2看出，该血清