间日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定.pdf

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1、·942·广东医学2010年4月第31卷第8期GuangdongMedicalJournalApr．2010。Vo1．31．No．8问日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定术孙莉，李明，吴英松，周志成，廖小青，郝文波南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所(广州510515)【摘要】目的研制间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)单克隆抗体，并对抗体特性进行了初步鉴定。方法用纯化的重组PvLDH蛋白免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行融合，间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，测定其免疫球蛋白亚类及效

2、价，结合ELISA、Westernblot试验分析其特异性。结果共获得5株稳定分泌抗PvLDH重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别为6D1、6D2、5A10、5C7、4A8。5株单抗培养上清的ELISA效价为1：512～1：1024，腹水效价为1：12800～1：25600，其中5C7、6D1经Western—blot鉴定能与天然的恶性疟原虫和间日疟原虫的LDH发生特异性反应。结论本研究方法成功制备并获得了针对PvLDH的单克隆抗体，为进一步研究疟疾诊断试剂奠定了基础。【关键词】间日疟原虫；乳酸脱氢酶；单克隆抗体Prep

3、arationandcharacterizationofmonoclonalantibodiesagainstlactatedehydrogenaseofPlasmodiumvivaxSUNLi，LIMing，f／y，一song，ZHOUZhi—cheng，LIAOXiao—qing，HAOWen—bo．InstituteofAntibocfyEngineer—ing，SchoolofBiotechnology，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，ChinaCorrespo

4、ndingauthor：HaoWen一60，Z：0086—20—62789355，E—mail：haowa@126．tom【Abstract】ObjectiveToprepareandcharacterizethemonoclonalantibodies(McAbs)againstlactatedehydrogen—aseofPlasmodiumvivax(PvLDH)．MethodsBALB／cmicewereimmunizedwithpurifiedrecombinantPvLDH．McAbsagainstPvLDH

5、werepreparedaccordingtotheprotocolofhybridomatechnique．PositivehybridomacelllineswerescreenedbyELISA．TheMcAbswerecharacterizedbyELISAandWesternblotanalysis．ResultsFivehybridomacelllines(6D1，6D2，5A10，5C7and4F8)secretingMcAbsagainstrecombinantPvLDHwereobtained．Allt

6、he5McAbswereIgG1．ThetitersoftheseMcAbsinsupematantandasciteswere1：5l2～1：1024and1：12800～1：25600，respectively．Westernblota—nalysisrevealedthattwooftheMcAbs(5C7and6D1)stronglyandspecificallyreactedwiththenativeLDHinPlasmadiumvivaxandPlsmodiumfalciparum．ConclusionTwo

7、hybridomacelllinessecretinghightiterofMcAbsagainstPvLDHwithhighspecificityhaveestablished．Itprovidesapotentialvalueforfurtherresearchonthediagnosisofmalaria．【Keywords】plasmodiumvivax；lactatedehydrogenase；monoclonalantibodies疟疾是严重危害人类健康的虫媒传染病，疟疾的蛋白，该重组蛋白可诱导小鼠产生针对P

8、vLDH的特异诊断是当今疟疾防治研究工作中的重要环节。近年来性免疫应答，获得的免疫血清能特异性地与间日疟原以单抗为基础的Dipstick免疫层析技术，在疟疾诊断虫和恶性疟原虫感染患者全血抗原发生反应，而不与上日渐受到重视，有望取代传统的显微镜检法用于疟正常人起交叉反应，表明该蛋白具有良好的抗原性和疾的早期快速筛查⋯。