恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达、纯化及单克隆抗体的制备

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1、缩略词Ampampicillin氨苄青霉素BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白dNTPdeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核糖核苷三磷酸DTTdithiothreitol二巯基苏糖醇EBethidiumbromide澳化乙锭EDTAethylenediaminotetraaceticacid乙_二胺四乙酸GDHglutamatedehydrogenase谷氨酸脱氢酶GICAGold—immunochromatographyassay胶体金免疫层析测试GSHreducedglutathione还原型谷胱肽GSSG

2、oxidizedglutathione氧化型谷胱甘肽GSTglytathioneS-transferase谷胱甘肽S一转移酶HAThypoxanthine—aminopterin—thymidine次黄嘌呤氨基喋呤胸腺嘧啶HEPESN一2-hydroyethylpiperazin～N’一2一一2羟乙基哌嗪一N’一2乙磺酸ethanesulfonicacidHRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶HRP一2histidine—richprotein2富含组氨酸蛋白2HThypoxanthine—thymidine次黄嘌呤氨基喋呤胸腺嘧啶I

3、CTImmunochromatographytest免疫色谱法测试ICTlICTMalariaP，恶性疟免疫色谱法测试ICT2ICTMalariaP耽V恶性疟／间日疟免疫色谱法测试IPT6isopropylthio—B—D-galactoside异丙基一B—D一硫代半乳糖苷KDakilodalton千道尔顿LBLuria-BertanimediumLB培养基LDHlactatedehydrogenase乳酸脱氢酶McAbmonoclonalantibody单克隆抗体ODopticaldensity光密度PAGEP01yacrylamidegelelectro

4、phoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应6一PEGPMSFQBCrpmSDSTMBTriSpolyethyleneglycolphenylmethylsulfonylfluorideQuantitativebuffycoatRevolutionsperminutesodiumdodecylsulfate3，35，5'-tetramethylbenzidinetrihydroxymethylamino—methanee7聚乙二醇苯甲基磺酰氟血块黄层定基法每分钟转数十二烷基硫酸钠3，35，5'-四甲基联

5、苯胺三羟甲基氨基甲烷恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达、纯化及单克隆抗体的制备(中文摘要)硕士研究生：李妍导师：李明疟疾是严重危害人类健康的虫媒传染病，广泛流行于热带和亚热带一些发展中国家。疟疾的诊断是疟疾防治工作中的一个重要环节，当前疟疾的发病率和死亡率难以控制的一个重要原因就是在疟疾流行区缺乏有效的诊断和治疗手段。传统的疟疾诊断方法由于操作复杂、设备昂贵、需专业人员因而难以在基层推广。近年来发展的以单克隆抗体为基础的免疫层析技术，以其快速、简便、可靠等优点在疟疾诊断中显示了广阔的应用前景，目前国外公司已开发出ParaSight—F(BectonDickinso

6、n，Cockeysoville，Maryland，US蝎、ICTMalariaEf莉ICTMalariaEfjPv(icrDiagnostics，Sydney,Australia)、OptiMAL(FlowInc，PortlandOreg)等一系列基于免疫层析的诊断试剂盒，现场评估取得较好的效果。但这些试剂盒价格昂贵，且均存在一定的局限性，因而有必要寻找一种更具有诊断价值的新型靶抗原。恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(Glutamatedehydrogenase，GDH)是疟原虫物质和能量代谢过程中一种十分重要的功能分子，对碳、氮代谢起重要作用，在疟原虫整个红内期均能

7、表达，它催化谷氨酸脱氨基生成a一酮戊二酸，同时使辅酶I、II由氧化型(NAD+、NADP+)转化为还原型(NADH、NADPH)。研究揭示，疟原虫GDH同脊椎动物组织的GDH在理化、生物学特性及酶学方面有较大差异，如疟原虫GDH活性不受嘌呤核苷酸(GTP、ADP)的影响，而脊椎动物组织的GDH可被GTP、ADP激活或抑制。疟原虫GDH特异地以辅酶II为其辅酶，而脊椎动物组织的GDH可以辅酶1或II作为辅酶。临床和实验研究证据表明，疟原虫比其宿主细胞更易受氧化压力影响，因此参与巯基代谢及还原型辅酶II(NADPH)再生的脱氢酶对于疟原虫免受宿主体内氧化剂损伤及

8、维持生存起着极其重要的作用。疟原虫GDH被认为是NA