中国安徽间日疟原虫dbpii克隆表达及其鉴定

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1、分类号R392密级学校代码UDC614.5编号学号中国安徽间日疟原虫DBPII克隆表达及其鉴定Cloning，expressionandidentificationofDuffyBindingProteinregionIIofPlasmodiumvivaxfromAnhui,China论文类别：学术研究型作者姓名刘丹指导教师姓名夏惠教授申请学位级别硕士学位授予单位蚌埠医学院学科专业病原生物学研究方向感染与免疫论文答辩时间2012年5月学位授予日期2012年6月答辩委员会主席：论文评阅人：2012年4月硕士学位论文论文题目：中国安徽

2、间日疟原虫DBPII克隆表达及其鉴定Cloning，expressionandidentificationofDuffyBindingProteinregionIIofPlasmodiumvivaxfromAnhui,China研究生姓名:刘丹指导教师:夏惠教授学科专业:病原生物学研究方向:感染与免疫论文工作时间:2010年6月至2012年3月学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行实验工作所取得的成果，本论文中不包含其他人已经发表或已经获取的研究成果。在本论文撰写中所引用其他研究者的研究内容

3、和成果时已在论文中给予特别标注和明确说明。对本论文的实验研究以及论文撰写过程中给予帮助和建议等贡献的其他人士，也已作了致谢说明。本人完全理解本声明的法律责任，以及所涉及的结果将由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日关于学位论著作权的共享声明根据《中华人民共和国著作权法》和《高等院校知识产权管理条例》，本学位论文，题目：中国安徽间日疟原虫DBPII克隆表达及其鉴定，是研究生在导师指导下完成的职务作品，得到我校相关部门科室的物质技术和经费支持，因此，本学位论文的著作权由研究生，导师和蚌埠医学院三方共同享有，均享有署名权和使用权等权

4、益；本学位论文成果归属蚌埠医学院。根据国家学位授予条例，学校对本学位论文有使用权，包括保存本学位论文；因教学和科研的目的，保留在图书馆被查阅或借阅；学校可根据国家规定将本学位论文送交国家有关部门保留和使用。学校在公布本学位论文的全部或部分内容时，应保障研究生和导师的署名权等权益。研究生和导师在公开发表本学位论文的全部或部分内容时必须保障学校的署名权等权益，即在发表论文时蚌埠医学院及相关部门科室应署名为作者单位。声明人完全理解本声明的法律责任。研究生签名：导师签名：日期：年月日目录1中文摘要………………………………………………………

5、……22英文摘要……………………………………………………………33论文正文前言………………………………………………………………4材料与方法………………………………………………………7结果………………………………………………………………17讨论………………………………………………………………244结论…………………………………………………………………265参考文献……………………………………………………………276致谢…………………………………………………………………7附录附录A英中文术语缩略语对照表………………………………31附录

6、B常用试剂配制……………………………………………33附录C个人简历及发表论文……………………………………附录D综述………………………………………………………………381中国安徽间日疟原虫DBPII克隆表达及其鉴定中文摘要目的（1）克隆中国安徽流行区间日疟原虫达菲血型结合蛋白II区基因（PlasmodiumvivaxDuffyBindingProteinregionII，PvDBPII）；（2）体外原核表达和鉴定重组PvDBPII蛋白。方法（1）根据GenBank收录的间日疟原虫Sa1-1株PvDBPII基因（GI：15608178

7、8）序列设计引物，从镜检阳性的间日疟原虫感染血样本中抽提DNA为模板，应用PCR技术从间日疟基因组DNA中扩增DBPII基因。PvDBPIIPCR产物与pET-28a载体分别经NcoI和HindIII双酶切后连接克隆入原核表达载体pET28a(+)中，构建pET28a(+)-PvDBPII重组表达质粒，采用双酶切及测序方法鉴定重组质粒。（2）将重组质粒pET28a(+)-PvDBPII转化至大肠埃希菌BL21(DE3+)中，IPTG诱导表达带有His标签的重组蛋白，采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白，采用SDS-PAGE电泳和Weste

8、rnBlotting分析鉴定表达产物。结果（1）PCR体外扩增得到目的基因片段长约1.1kb。双酶切及测序结果显示目的基因己被正确地连接入重组质粒pET28a(+)中，其插入片段序列与Sa1-1株PvDBPII基因参考序列相比存在四个非同义突变位点