抗鹅细小病毒NSI蛋白单链抗体的构建、表达及活性初步鉴定.pdf

《抗鹅细小病毒NSI蛋白单链抗体的构建、表达及活性初步鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、HeilongjiangAnimalScience80andVeterinaryMedicineNo12200910000倍稀释的DuIFN一处理的鸭胚成纤维细胞一43a(+)具有组氦酸标签(His—Ta)，可方便用于全部发生皱缩，变圆，病变程度接近阳性对照。经计蛋白的精细纯化。算，DuIFN一抗病毒活性约为1000U／mL，比活力猪水泡性口炎病毒广泛用于人类干扰素效价的为5000U／mg。评价。在我国，按《中国生物制品规程》(1995)中要3讨论求采用WISH／VSV体系(WISH细胞为人羊膜细胞)通常情况下，动物机体只在一定诱因下产生干扰测定，根据干扰素对WISH细胞的保

2、护性，即细胞的素，病毒是最常见的干扰素诱生剂。除了病毒，干扰病变程度按5级打分法记录不同浓度时的保护性，用素诱导剂还有细胞内微生物(包括细菌、支原体、衣国家标准品(Lot03／94)为参考标定其IU值。由于原体、疟原虫等)、细菌产物(如真菌多糖)、多聚物干扰素的抗病毒效果不是直接的，它是通过作用于受(如多核苷酸等)、低分子物质(如卡那霉素等)、某些体细胞激活一系列酶系统表达出抗病毒活性物质而植物药(如黄芪等)、细胞有丝分裂素(如PHA、Co．达到抗病毒效果，所以干扰素与其受体细胞间的结合hA)等。研究从新城疫病毒刺激的鸭脾淋巴细胞培具有特异性，从而导致它具有种属特异性，因此评

3、价养液中提取基因组，采用RT—PCR技术扩增鸭一不同的干扰素要选择不同的指示细胞。动物干扰素干扰素基因，结果表明该方法是可行的。研究较晚，特别是对鸭干扰素研究更少，目前亦无参试验选用pET一43a(+)载体和大肠杆菌BL21照的标准品，更无统一的检测规范。对禽类干扰素效(DE3)感受态细胞作为原核表达系统。pET一43a价的评价，目前一般报道为本属动物成纤维细胞／(+)载体是较好地用于原核表达的载体，含有17VSV体系。本试验采用鸭胚成纤维细胞／VSV体系，RNA聚合酶启动子，能在溶原性大肠杆菌BL21感受通过该系统直接与对照细胞比较，以能抑制50％细态细胞中经诱导后进行高效

4、表达。BL21是含有噬菌胞病变的干扰素最高稀释度为1个效价单位，经测定体的大肠杆菌，包含lacUVS启动子基因和T7RNA表达蛋白1000U／mL对猪水泡性口炎病毒有明显聚合酶基因。在BL21中，lacUVS启动子直接调控的抑制作用，为进一步的动物体内抗病毒试验打下了T7RNA聚合酶的转录，经IPTG诱导产生蛋白。pET基础。(009)抗精细病毒NS1蛋白单链抗体的构建表达及活性韧步鉴定王锐，鞠环宇，王兆鹏，卫娜，霍慧，仇铮，马波，王君伟(东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030)中图分类号：$852．659．2文献标识码：B文章编号：1004—7034(2009)

5、12—0080—04鹅细小病毒(Gooseparvovirus，GPV)是小鹅瘟肽链长度大小为NS1>NS2。NS1为磷酸化的蛋白，(Goslingplague，GP)的病原体，由于其感染雏鹅和其功能是：1)抑制细胞DNA的复制；2)对衣壳蛋白雏番鸭且传播快、病死率高，引起国内外学者的广泛的启动子起正调节作用；3)对病毒DNA的复制是必重视。在病毒分类上鹅细小病毒为细小病毒科依赖须的；4)对P4启动子和异种启动子起负调节作用。病毒属成员，基因组为单股、线性DNA，由5106个核随着基因工程抗体技术的发展，将单克隆抗体改苷酸组成，含有2个开放阅读框架，左侧ORF编码造成为具有抗

6、原结合能力的Fab、Fv、ScFv等抗体片2个非结构蛋白(NS1和NS2)，右侧ORF编码3个结段，已成为抗体生物治疗的主要研究方向。单链抗构蛋白VP1、VP2、VP3，编码非结构蛋白二者基因的体(singlechainfragmentofvarietyregion，ScFv)是具起始密码子的位置不同，但共用终止同一密码子，它有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单们的氨基酸序列按肽链C端到N端方向完全重叠，位，具有组织穿透力强、分子质量小、免疫原性低、血流中半衰期短等特点。试验从分泌抗GPV—NS1单收稿日期：2009—03—05：修回日期：2009—10—10克隆抗体

7、的杂交瘤细胞中克隆得到抗体的重链和轻基金项目：王锐(1982一)，男，硕士研究生．链可变区基因，构建抗GPV—NS1蛋白单链抗体基作者简介：王君伟(1960一)，男，教授，博士，博士生导师因，并将其在大肠杆菌中表达，试图获得具有生物活《黑龙江畜牧兽医》科技版2009年12月(上)81性的单链抗体蛋白。所有引物均由上海生工生物工程技术服务有限1材料与方法公司合成。1．1材料1．2．2总RNA的提取与cDNA的制备在细胞培1．1．1细胞株、载体和菌种分泌抗GPV—NS1单养瓶中培养分泌抗GPV—NS1杂交瘤