高效液相色谱法检测水产品中的四环素类药物残留.pdf

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1、《河北渔业》2O15年第3期(总第255期)o检验与检测DOI：10．3969／j。issn．1004—6755．2015．03．019高效液相色谱法检测水产品中的四环素类药物残留马瑞欣。，周凡，郝新丽一，王国辉。(1．河北省水产养殖病害防治监测总站，河北石家庄050011；2．河北省水产品质量检验检测站。河北石家庄050011；)摘要：建立了水产品中土霉素、四环素、金霉素的快速提取方法。样品用甲醇+水+甲酸一8o+20+0．3的溶液和0．3甲酸的甲醇溶液两步提取，减压蒸去甲醇，定容后高效液相色谱分析。土

2、霉素回收率在75．9O％～116．2之间，四环素回收率在67．87％～102．2％之间，金霉素回收率在43．78～84．17％之间，RSD<15。土霉素和四环素检出限0．1mg／kg，金霉素检出限0．2mg／kg。关键词：高效液相色谱法(HPLC)；水产品；土霉素；四环素；金霉素四环素类药物属广谱抗生素，具有良好的杀土霉素、四环素、金霉素均购自德国Dr．Eh—菌和抗菌作用，水产养殖中常用于防治水生动物renstorfer；甲醇、正己烷为色谱纯，甲酸、磷酸二的细菌性疾病，但这些药物会在水生动物体内残氢钠、磷

3、酸、乙二胺四乙酸二钠(NaEDTA·留，从而对人类的健康产生有害影响。目前检测2H。o)均为分析纯。水产品中四环素类药物残留的方法有液相色谱0．01mol／L磷酸二氢钠溶液的配制：称取法_l]、液质联用法I3等。这些方法采用高氯酸1，56g磷酸二氢钠(NaHPO·2HO)，溶于超溶液或缓冲溶液提取，经固相萃取柱净化，浓缩后纯水中，定容至1000mL，用磷酸调pH一2．5，过进行仪器分析，前处理步骤繁琐，所用试剂耗材较0．45m滤膜备用。多，且提取液浑浊，造成固相萃取净化困难，从而实验用水为超纯水。延长了前

4、处理时间。本文建立了一种检测水产品储备液的配制：分别准确称取按其纯度折算中四环素类药物残留量的前处理方法，步骤简单，为100质量的土霉素、四环素、金霉素各10．0所用试剂耗材少，前处理时间短，可用于水产品中mg，分别用甲醇溶解并定容至100mL，三种储备土霉素、四环素、金霉素的快速筛选。液的浓度均为100／~g／mL，一18℃避光保存。标准曲线的配制：取上述贮备液用0．3甲1材料与方法酸水溶液稀释成土霉素、四环素含量为0．050、1．1仪器与试剂0．1O0、0．200、0．500、1．000、2．000“

5、g／mL，金霉HPLC1100配有紫外检测器(Agilenttech—素含量为0．100、0．200、0．400、1．000、2．000、nologies)；漩涡振荡器(IKA，MS3)；离心机(湖南4．000／~g／mL的混合标准溶液。湘仪，TDZ5一WS)；高速离心机(上海安亭，TGL1．2色谱条件一16C)；多样品平行蒸发仪(syneore，BUCHI)；色谱柱：ZORBAXEclipseXDB—C18柱超纯水仪(MILLI—Q，millipore)；十万分之一电(4．6mm×250mm，粒度5m)

6、；流动相：乙腈+子天平(赛多利斯，CPA225D)；百分之一电子天0．O1mol／L磷酸二氢钠溶液(pH一2．5)一2O+平(赛多利斯，TE212一L)。80；流速0．8mL／min；紫外检测波长355nm；柱基金项目：河北省现代农业产业体系特色海产品创新团队资助。作者简介：马瑞欣(1973．4一)，女，工程师，疫病防控与质量安全岗位团队成员。maruixin2003@i26．com一51—《河北渔业))2015年第3期(总第255期)o检验与检测温：37℃；进样量：2OI。续表1．3实验方法1．3．1样

7、品制备鱼取脊背肉，切成小块，虾、蟹取可食部分，海参去除内脏，切成小块，分别绞碎混匀成肉糜，放人干净密闭的容器内，一18℃以下保存。1．3．2样品前处理称取样品5．00g于50mL塑料离心试管中，加入lomL甲醇+水+甲酸一80+20+0．3混合溶液，3000r／rain涡旋振荡2min，4000r／rain离心5min，上清液倒入5OmL试管中。在样品中再加入15mL0．3甲酸的甲醇溶液，3000r／min涡旋振荡2min，4000r／rain离心5min，合并上清液。在上清液中加入正己烷15mL，涡旋振

8、荡lmin，静止分层，弃去上层，再加入15mL正己烷去脂1次，下层溶液减压蒸去甲醇，用0．3甲酸水溶液定容至5mI，加入5mL正己烷离心去脂，取1．5mI下层溶液10000r／rain离心5rain，过0．45m滤膜，高效液相色谱分析。2结果与讨论2．1回收率和精密度分别称取草鱼、对虾、梭子蟹、海参四种空白样品，进行标准物质添加后混合均匀。除0．100mg／kg添加样品一20℃存放24h外，其他添加样品均在一20℃存放72～9