高效液相色谱法检测水产品中的四环素类药物残留-畜牧渔业论文

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1、高效液相色谱法检测水产品中的四环素类药物残留-畜牧渔业论文高效液相色谱法检测水产品中的四环素类药物残留马瑞欣1，2，周凡1，2，郝新丽1，2，王国辉1，2（1.河北省水产养殖病害防治监测总站，河北石家庄050011；2.河北省水产品质量检验检测站，河北石家庄050011；）基金项目：河北省现代农业产业体系特色海产品创新团队资助。作者简介：马瑞欣（1973.4-），女，工程师，疫病防控与质量安全岗位团队成员。[emailprotected]DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2015.03.019摘要：建立了水产品中土霉素、四环素、金霉素的快速提取

2、方法。样品用甲醇＋水＋甲酸＝80＋20＋0.3的溶液和0.3%甲酸的甲醇溶液两步提取，减压蒸去甲醇，定容后高效液相色谱分析。土霉素回收率在75.90%～116.2%之间，四环素回收率在67.87%～102.2%之间，金霉素回收率在43.78%～84.17%之间，RSD15%。土霉素和四环素检出限0.1mg/kg，金霉素检出限0.2mg/kg。关键词：高效液相色谱法（HPLC）；水产品；土霉素；四环素；金霉素四环素类药物属广谱抗生素，具有良好的杀菌和抗菌作用，水产养殖中常用于防治水生动物的细菌性疾病，但这些药物会在水生动物体内残留，从而对人类的健康产生有害影响。目前检测

3、水产品中四环素类药物残留的方法有液相色谱法[1-2]、液质联用法[3]等。这些方法采用高氯酸溶液或缓冲溶液提取，经固相萃取柱净化，浓缩后进行仪器分析，前处理步骤繁琐，所用试剂耗材较多，且提取液浑浊，造成固相萃取净化困难，从而延长了前处理时间。本文建立了一种检测水产品中四环素类药物残留量的前处理方法，步骤简单，所用试剂耗材少，前处理时间短，可用于水产品中土霉素、四环素、金霉素的快速筛选。1材料与方法1.1仪器与试剂HPLC1100配有紫外检测器（Agilenttechnologies）；漩涡振荡器（IKA，MS3）；离心机（湖南湘仪，TDZ5-WS）；高速离心机（上海安

4、亭，TGL-16C）；多样品平行蒸发仪（syncore，BUCHI）；超纯水仪（MILLI-Q，millipore）；十万分之一电子天平（赛多利斯，CPA225D）；百分之一电子天平（赛多利斯，TE212-L）。土霉素、四环素、金霉素均购自德国Dr.Ehrenstorfer；甲醇、正己烷为色谱纯，甲酸、磷酸二氢钠、磷酸、乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2H2O）均为分析纯。0.01mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取156g磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O），溶于超纯水中，定容至1000mL，用磷酸调pH＝2.5，过0.45μm滤膜备用。实验用水为超纯水。储备

5、液的配制：分别准确称取按其纯度折算为100%质量的土霉素、四环素、金霉素各100mg，分别用甲醇溶解并定容至100mL，三种储备液的浓度均为100μg/mL，-18℃避光保存。标准曲线的配制：取上述贮备液用0.3%甲酸水溶液稀释成土霉素、四环素含量为0.050、0100、0.200、0.500、1.000、2.000μg/mL，金霉素含量为0.100、0.200、0.400、1.000、2.000、4000μg/mL的混合标准溶液。1.2色谱条件色谱柱：ZORBAXEclipseXDB-C18柱（46mm×250mm，粒度5μm）；流动相：乙腈＋0.01mol

6、/L磷酸二氢钠溶液（pH＝2.5）＝20＋80；流速0.8mL/min；紫外检测波长355nm；柱温：37℃；进样量：20μL。1.3实验方法1.3.1样品制备鱼取脊背肉，切成小块，虾、蟹取可食部分，海参去除内脏，切成小块，分别绞碎混匀成肉糜，放入干净密闭的容器内，-18℃以下保存。1.3.2样品前处理称取样品5.00g于50mL塑料离心试管中，加入10mL甲醇＋水＋甲酸＝80＋20＋0.3混合溶液，3000r/min涡旋振荡2min，4000r/min离心5min，上清液倒入50mL试管中。在样品中再加入15mL0.3%甲酸的甲醇溶液，3000r/min涡旋振荡2m

7、in，4000r/min离心5min，合并上清液。在上清液中加入正己烷15mL，涡旋振荡1min，静止分层，弃去上层，再加入15mL正己烷去脂1次，下层溶液减压蒸去甲醇，用0.3%甲酸水溶液定容至5mL，加入5mL正己烷离心去脂，取1.5mL下层溶液10000r/min离心5min，过0.45μm滤膜，高效液相色谱分析。2结果与讨论2.1回收率和精密度分别称取草鱼、对虾、梭子蟹、海参四种空白样品，进行标准物质添加后混合均匀。除0.100mg/kg添加样品-20℃存放24h外，其他添加样品均在-20℃存放72～96h后取出，室温下解冻后进行实验。土霉素