优化高效液相色谱法检测鸡肉中氟喹诺酮类药物残留情况

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1、优化高效液相色谱法检测鸡肉中氟喹诺酮类药物残留情况　　诺氟沙星(NOＲ)、恩诺沙星(ENＲ)、环丙沙星(CIP)、达氟沙星(DAN)和沙拉沙星(SAＲ)为常见的氟喹诺酮类抗菌剂，目前在畜禽生产中被广泛应用．此类药物使用不当导致的药物残留可能直接危害人体健康，也可能使致病菌产生耐药性，间接对人类健康造成影响．多个国家和地区均规定了氟喹诺酮类药物的最高残留限量．检测动物源食品中氟喹诺酮类药物残留的方法有微生物法、酶联免疫法(ELISA)、毛细管区带电泳法、电解分析法、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱－质谱联用法(HPLC-M

2、S)等．目前，在鸡肉产品的检测中，常采用的方法是《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测－高效液相色谱法》(农业部1025号公告14-2008)．本试验以此标准为基础，简化了试验前处理方法，优化了检测过程．经试验验证，该法非常适合大批量处理样品，大量节省了处理时间和所需耗材，较大幅度降低成本，方法的灵敏度和回收率均可满足我国现行兽药残留检测分析的要求．　　　　1材料与方法　　1．1药品和试剂　　恩诺沙星对照品、环丙沙星对照品、诺氟沙星对照品、达氟沙星对照品、沙拉沙星对照品，均为中国兽医药品监察所产品，磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺、氢氧化

3、钠溶液(分析纯，广州试剂厂)，乙腈(色谱纯，Fisher公司)．　　　　1．2仪器和设备　　Agilent高效液相色谱仪(美国Agilent公司)配荧光检测器，高速匀质机及振荡器(德国IKA公司)，高速台式冷冻离心机(美国Thermo公司)．　　　　1．3试液配制　　分别称取恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星对照品各10mg，置于同一个10mL容量瓶中，用0.05molL－1的氢氧化钠溶液溶解定容至刻度，制得质量浓度均为1mgmL－1的混合储备溶液．准确称取达氟沙星对照品10mg，0.05molL－1的氢氧化钠溶液溶解定容至10mL，

4、使其质量浓度为1mgmL－1．准确称取沙拉沙星对照品10mg，0.05molL－1的氢氧化钠溶液溶解定容至10mL，使其质量浓度为1mgmL－1．置2～8℃冰箱中保存备用，有效期1个月．取上述恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星的混和储备液100μL，达氟沙星储备液20μL，沙拉沙星储备液200μL，置于同一个100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，配置成恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的质量浓度为1μgmL－1，达氟沙星质量浓度为0.2μgmL－1，沙拉沙星质量浓度为2μgmL－1的混合标准溶液．提取液

5、:称取2g三氯乙酸于容量瓶中，加水至100mL，制得的三氯乙酸溶液与乙腈按体积比3∶1的比例混合，搅拌均匀，得到提取液．磷酸/三乙胺溶液:取磷酸3.4mL，用水稀释至1000mL，配成0.02molL－1的磷酸溶液，用三乙胺调pH至2.4．临用配制(易产生沉淀)．　　　　1．4测定方法　　1．4．1供试材料的制备将市售的鸡肉样品用高速匀浆机绞碎得到供试试料，将空白鸡肉样品绞碎得到空白试料，在空白试料中添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料．　　　　1．4．2提取与净化称取1g试料，置于匀浆杯中，加提取液4mL，高速匀浆1min．

6、匀浆液转入15mL聚丙烯离心管中，振荡30min，16000r/min，离心8min，取上清液过0.2μm滤膜，装入进样瓶，待测．　　　　1．4．3色谱条件色谱柱:AgilentTC-C18250mm4.6mm(i．d)，粒径5μm．流动相:V(0.02molL－1磷酸/三乙胺溶液)∶V(乙腈)=80∶20．流速:1mLmin－1．检测波长:激发波长280nm;发射波长450nm．进样量:20μL．　　　　1．5线性范围与检出限　　空白样品中加入混合标准液配制成的诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星

7、系列标准溶液．高效液相色谱仪检测后，以峰面积为纵坐标，药物质量浓度为横坐标，进行线性回归分析．在空白样品中添加不同质量浓度混合标准溶液，按1.4的方法进行处理，检测后取信噪比S/N=3对应的样品浓度为方法检出限(LOD)，信噪比S/N=10对应的样品浓度为方法定量限(LOQ)．　　　　1．6回收率和精密度　　向空白待测样品中分别添加3个浓度水平的混合标准液，按1.4的方法进行处理，每个浓度重复5次，连续做3个批次，计算回收率和变异系数．　　　　2结果与分析　　　　2．1色谱分析　　在试验选定的条件下，测得诺氟沙星的保留时间为6.

8、67min，环丙沙星为7.19min，达氟沙星为8.18min，恩诺沙星为9.07min，沙拉沙星为12.93min，峰形尖锐，分离完全，空白组织样品在上述保留时间无干扰峰出现(图1)．　　　　2．2方法的检出限及标准曲线　　空白鸡肉样品中添加不同质量浓度的标准