氟喹诺酮类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立.pdf

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1、第33卷第11期中国预防兽医学报Vo1．33．NO．112011年11月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineNOV．20l1doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．11．14氟喹诺酮类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立姜金庆1,2，杨雪峰，王自良，常新耀，王三虎，刘兴友z(1．河南科技学院动物科学学院，河南新乡453003；2．动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心，河南新乡453003)摘要：为建立同时检测多种氟喹诺

2、酮药物的免疫学分析方法，本研究以碳二亚胺(EDc)二步法合成环丙沙星人工抗原，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0．2ng／mL~376ng／mL，半数抑制浓度Oc50)为8ng／mL，检测限(L0D)为0．1ng／mL；抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别，IC5o值分别为7．3ng／mL、10．6ng／mL、和13．2rig／mE；标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10％和30％；牛奶基质中添加5ng／mL、20ng／

3、mL和50ng／mL的标准品，环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93％～108％、96％～110％、92．5％～104％和93％～102％。关键词：环丙沙星；多克隆抗体；间接竞争ELISA；氟喹诺酮药物；多残留检测中图分类号：S859．79文献标识码：A文章编号：1008—0589(2011111-0887—06DevelopmentofindirectcompetitiveELISAfordetectionoffIuOrOquinOlOneresiduesJIANGJin—qing'，YAN

4、GXue—feng，WANGZi—liang，CHANGXin-yao，WAMGSan—hu，LIUXing—you(1．CollegeofAnimalScience，HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，China；2．HenanHigherEducationEngineeringTechnologyResearchCenterforAnimalDiseasesControlandResiduesSupervison，Xinxiang45300

5、3，China)Abstract：Todevelopamultideterminationimmunoassayforfluoroquinolone(FQs)residues，anindirectcompetitiveELISAwasdevelopedwiththepolyclonalantibodyagainstciprofloxacin(CPFXpAb)producedfromrabbitswhichimmunizedwithFQsconjugatedBSA．Thismethodwassensitivean

6、dhadalineardetectionrangefrom0．2ng／mLto376ng／mL(RZ=0．943)，withIC50andLODvaluesof8ng／mLand0．1ng／mL．TheantibodyexhibitedhighsensitivitytoFQs，andtheIC∞valuestoenrofloxacin，norfloxacinandpefloxacinwere7．3ng／mL，10．6ng／mL，and13．2ng／mL，respectively．Theoptimizeddete

7、ctingconditionindicatedthattheconcentrationsofNaOHandmethanolindilutesolutionwaslessthan10％and30％．Whentheciprofloxacin，enrofloxacin，norfloxacinandpefloxacininmilkwereathighestconcentrationsof5ng／mL，20ng／mLand50ng／mL，therecoverieswererangedfrom93％to108％，96％to

8、110％，92．5％to104％，and93％to102％，respectively．Keywords：ciprofloxacin；polyclonalantibody；indirectcompetitiveELISA；fluoroquinolone；multiresiduedetermination*Correspondingauthor收稿日期：2011-05—14基金项目：国家十