非酒精性脂肪肝离体细胞模型的建立.pdf

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1、中国药物与临床2015年3月第15卷第3期ChineseRemedies＆Clinics，March2015，Vo1．15，No．3·349·Physiol，2002，282(3)：L370-378．(1)：5-12．[4]ZarubinT，HanJ．ActivationandsignalingoftheP38MAPki—[8]KimuraKS，KanayaN，KamadaN，eta1．Cardioprotectiveefectnasepathway[J]．CellRes，2005，15(1)：11-18．andmechanismof

2、actionoflandiololontheischemicrepefused[5]SchievenGL．ThebiologyofP38kinase：acentralroleininflam-heart[J]．Anesth，2007，21(4)：480-489．marion[J]．CurrTopMedChem，2005，5(10)：921·928．[9]BhandariV．Developmentaldifferencesintheroleofinterleukins[6]PeiferC，WagnerG，LauferS．Newappro

3、achestothetreatmentofinhyperoxielunginjuryinanimalmodels[J]．FrontBiosci，2002，inflammatorydisorderssmallmoleculeinhibitorsofP38MAPki—7(3)：1624-1633．nase[J]．CurtTopMedChem，2006，6(2)：113—149．[1O]党润，许峰．TGF—p在高氧性肺损伤纤维化中的研究进展[J]．[7]SpitellerG．Theimportantroleoflipidperoxidati

4、onprocessesin国外医学儿科学分册，2003，30(4)：210·213．ngandagedependentdiseases[J]．MolBiotechnol，2007，37(收稿日期：2014．10—23)非酒精性脂肪肝离体细胞模型的建立张玲荣赵晶晶王勤英随着人们生活水平提高，非酒精性脂肪肝(NAFL)及非种于96孔培养板，调细胞悬浮液浓度为l04／孑L(无菌PBS填酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发病率呈逐年上升趋势0,2】，严充边缘孔)，每孔250l，并设置单纯培养基为调零孔。37℃，重威胁人类健康。目前，对NAFL的研

5、究最常采用的是动物体积分数为5％CO孵育HepG2细胞24h，镜下观察到细胞模型，但动物模型存在个体差异大，研究周期长，实验条件不贴壁，按实验分组，每组设置6个复孔。各孔HepG2细胞分易控制等不利因素。而细胞模型能较好地克服上述因素，有别在作用12、18、24h时，加噻唑蓝(M1-r)溶液20l，孵育4针对性地研究NAFL发病的细胞机制，且能进一步缩短药物h。吸去各孔内细胞培养液。加入150IxlDMSO溶液，置96孔干预的进程[31。因此。建立NAFL体外细胞模型对研究其发培养板于微板振荡器震荡10min，使结晶物充分溶解。在酶病

6、机制，为进一步防治NAFL具有重要的理论意义与广泛的标仪吸光值(A值)490nm处测各孔A值并记录实验结果。实用价值。以实验时间为横坐标。A值为纵坐标，绘制HepG2细胞生长1材料和方法曲线。(4)油红O染色并计算细胞脂变率：①油红O染色：油1．1材料：细胞来源：HepC2细胞由长治医学院肝病研究所红O与双蒸水以3：2混合，滤纸过滤2—3次，室温放置10惠赠。达氏修正依氏培养基(DMEM)购自美国Gibco公司，胎min使用。吸去6孔板中的培养基。PBS溶液每孔2ml，洗涤牛血清(FBS)购自杭州四季青公司。油酸购白天津风船化学2次。

7、4％多聚甲醛固定细胞10rain。每孔加过滤后的油红0试剂科技有限公司，二甲基亚砜(DMSO)购自美国Sigma公染液1～2ml。室温下染色30min。吸出油红0染液，加入苏司，油红O购自上海化学试剂公司，甘油三酯(TG)试剂盒、木素染色5min。吸出苏木素液，在盐酸：75％酒精=l：l液中快蛋白定量试剂盒购自南京建成生物工程公司。速风化。每孔加PBS溶液2ml，洗涤2遍。光镜下观察，拍片。1．2方法：(1)HepG2细胞培养：含10％胎牛血清(FBS)的封片。(~)HepG2细胞不同作用时间点细胞脂变率：光镜下对DMEM完全培养基传

8、代培养HepG2细胞。(2)实验分组：油红O染色细胞片中的脂肪变性细胞进行计数。结果判定标HepG2细胞以104个，孑L细胞接种于6孔培养板中，在37℃，准为：发生脂变的HepG2细胞的胞质内有橘红色小脂滴；记体积分数为