泛素连接酶Nedd4调控人前列腺癌细胞的增殖与凋亡.pdf

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1、第29卷第5期天津科技大学学报、，o1．29No．52014年10月JournalofTianjinUniversityofScience&Technology0ct．2014DOI：10．133648．issn．1672-6510．2014．05．004泛素连接酶Nedd4调控人前列腺癌细胞的增殖与凋亡周洁，李玉银，赵昌彩，刁爱坡(天津科技大学生物工程学院，天津300457)摘要：为了研究泛素连接酶Nedd4对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响，利用小RNA干扰技术，通过慢病毒包装，侵染前列腺癌细胞DU1

2、45，达到下调Nedd4表达的目的．MTT检测表明，下调Nedd4表达可以抑制DU145细胞的增殖；DAPI染色发现，下调Nedd4表达的DU145细胞对星形孢菌素诱导的细胞凋亡更加敏感．这些结果都说明，下调Nedd4的表达不仅可以抑制DU145肿瘤细胞增殖，而且可以促进细胞凋亡．关键词：Nedd4；前列腺癌细胞；细胞增殖；细胞凋亡中图分类号：R737．25文献标志码：A文章编号：1672．6510(2014)05—0015-05EfectsofUbiquitinLigaseNedd4onHuma

3、nProstateCancerCellProliferationandApoptosisZHOUJie，LIYuyin，ZHAOChangcai，DIAOAipo(CollegeofBiotechnology，TianjinUniversityofScience&Technology，Tianjin300457，China)Abstract：TostudytheefectsofNedd4ontumorcellproliferationandapoptosis，Nedd4wasdepletedinp

4、rostatecancercellDU145byinfectingthelentivirusesexpressionofNedd4一shRNAs．MTTassayshowedthatthatdepletionofNedd4de—creasedDU145cellproliferation．DAPIstainingindicatedthatknockdownofNedd4resultedingreatersensitivitytostauro．sporine—inducedapoptosisofDU1

5、45cells．Theseresultsrevealedthatthedown—regulationofNedd4expressionnotonlyreducedthecellproliferationbutalsoinducedtheapoptosisOfDU145cells．Keywords：Nedd4；prostatecancercell；cellproliferation；cellapoptosis泛素连接酶和肿瘤的发生、发展以及转移密切相ence，RNAi)技术得到广泛应用．RNAi是一

6、种普遍关⋯．在哺乳动物中，被鉴定的泛素连接酶有600多的转录后基因沉默机制，由Fire等]于1998年发种．泛素连接酶主要分两大类：RING家族和HECT现．目前，主要通过两条途径来实现RNAi：第一，通家族．HECT家族由28种蛋白组成，基于结构的不过转染短链干扰RNA(shortinterferingRNAs，同，HECT泛素连接酶家族成员多数分属于两个亚家siRNA)，实现目的基因沉默；第二，利用表达载体和族：Nedd4家族和HERC家族J．逆转录病毒进行短链发夹RNA(shorthairp

7、inRNAs，Nedd4家族包括9个成员：Nedd4—1、Nedd4—2shRNA)的转录，完成目的基因表达的降低【6】．(Nedd4L)、ITCH、Smurfl、Smurf2、WWP1、WWP2、无论是转染siRNA还是shRNA的转录，在体内NEDL1、NEDL2．这9个成员具有相似的结构，这些实验和活体实验中【9J，RNAi的作用都可能出现被抑结构包括一个N端的C2结构域，中间有2～4个制的现象．Rubinson等o]利用shRNA慢病毒系统实ww结构域，c端的与E6AP(E6associa

8、tedprotein)LjJ现了在哺乳动物细胞、干细胞、受精卵及已分化的后同源的COOH端]．Nedd4家族泛素连接酶在癌症代细胞中干扰目的基因表达．shRNA慢病毒系统进发生过程中起着重要作用．行的基因沉默具有高特异性、高稳定性的优点，并且在研究基因功能方面，RNA干扰(RNAinterfer．能够在多种细胞及转基因小鼠中实现基因沉默．慢收稿日期：2013～12—18；修回日期：2014-03—31基金项目：天津市自然科学基金重点资助项目(10JCZDJC16800)；国家自然科