泛素连接酶rnf2bmi1对食管癌细胞凋亡迁移能力和细胞周期的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师[或指导小组]的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。研究蚣孙王良新签硼蝴河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研

2、究生签名：王族『＼新缔和嘲．2-oIS沁万方数据目录中文摘要1英文摘要4英文缩写．6研究论文泛素连接酶RNF2／BMll对食管癌细胞凋亡迁移能力和细胞周期的影响前言目U舌．1／．材料与方法+．8结果17附图20附表29讨论32结j沦34参考文献35综述BMll与肿瘤放射敏感性的研究进展．38致谢47个人简历48万方数据中文摘要泛素连接酶RNF2／BIII1对食管癌细胞凋亡迁移能力和细胞周期的影响摘要目的：观察食管癌细胞接受电离辐射后，BMll和RNF2蛋白表达的时间剂量效应关系，利用RNA干扰技术抑制ECAl09食管癌细胞中BMll和RNF2的基因表达，观察其对细胞增殖

3、活性、迁移能力、凋亡和细胞周期的影响，为提高食管癌细胞放射敏感性奠定基础。方法：1培养ECAl09食管癌细胞株，逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMll和RNF2mRNA水平表达，流式细胞技术(FCM)检测BMll和RNF2蛋白水平表达，MTT法检测ECAl09食管癌细胞的增殖状况。2将BMI1和RNF2siRNA转染ECAl09食管癌细胞，westernblotting检测ECAl09．B组和ECAl09．R组细胞中BMll和RNF2的蛋白表达，FCM检测6Gy照射后lh、2h、4h、8h、12h、24h，ECAl09组、ECAl09一N组、ECAl09．B组

4、、ECAl09．R组细胞周期分布的变化和凋亡比例，Transwell侵袭小室模型检测转染ECAl09一B组、ECAl09．R组细胞的迁移能力。结果：1ECAl09食管癌细胞增殖活性和迁移能力1．1ECAl09食管癌细胞中BMll和RNF2在mRNA水平和蛋白表达水平上均有表达。与对照组相比，不同剂量照射组食管癌细胞中，BMll和RNF2在mRNA水平和蛋白表达水平均明显增加耿0．01)，且随着照射剂量的增加，BMll和RNF2表达水平逐渐增加，具有统计学意义。在1、2、4Gy照射后2hBMll和RNF2mRNA水平和蛋白表达水平均达到峰值，6Gy、8Gy照射后1h达到峰

5、值，随着照射后时间的延长，BMll和RNF2的表达量逐渐降低。1．2MTT检测结果显示，与未照射组相比，各剂量组ECAl09食管癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(尸<0．01)，随着照射后时间的延长，ECAl09组和ECAl09-N组细胞增殖活性逐渐增加，但ECAl09-B万方数据中文摘要组和ECAl09-R组细胞在4h、8h、12h及24h的增殖活性均明显低于ECAl09组和ECAl09．N组(氏O．01)。1．3Westernblotting检测结果显示，ECAl09一B组、ECAl09．R组细胞中BMll、RNF2蛋白表达水平均明显低于ECAl09组和

6、ECAl09-N组(氏0．01)，而ECAl09组与ECAl09-N组细胞相比，未见明显统计学差异(pO．05)。1．4Transwell侵袭小室模型检测结果显示，照射后3．5hECAl09．B组和ECAl09．R组穿膜细胞数明显低于ECAl09组和ECAl09．N组，具有显著性差异(P

7、Al09、ECAl09．N、ECAl09一B和ECAl09．R细胞中处于Go／G1期、GjM期和S期的比例均未见明显变化(尸>0．05)，6Gy放射线照射后处于Go／G，期细胞的比例均明显低于相应未照射组(P<0．01)，且照射后ECAl09-B组和ECAl09．R组处于Go／G1期的比例均明显高于照射后的ECAl09组和ECAl09-N组(P