多发性硬化抗原特异性调节性T细胞的免疫活性.pdf

《多发性硬化抗原特异性调节性T细胞的免疫活性.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、l80ChinJNervMentDisVo1．41。No．3March2015·短著述·健康对照经检查均排除神经系统疾病和其他自身免疫病。B细胞由同种异体的健康志愿者外周血分离。多发性硬化抗原特异性调节性T细胞1．2B细胞的磁珠分选、体外培养人CD4+初始T细胞的磁珠分选及鉴定使用B细胞的磁珠分离试剂盒和CD4初的免疫活性☆始T细胞的磁珠分离试剂盒进行，具体操作步骤见。1．3人MBP特异性Treg的诱导、扩增及分选将MS患姜红刘广志周建华杨亭亭向雅娟者及健康对照CD4初始T细胞与同种异体B细胞混合，加敖冬慧高旭光入MBP肽

2、段(0．2p,g／mL)、可溶性4—1BBL(0．2ltg／mL)、雷帕霉素(109nmol／L)培养10d，加入抗人CD4(Percp)、【关键词】多发性硬化CD4CD25调节性T细胞白介CD25(APC)、CD127(FITC)单抗送北京大学医学部流式细胞素转化生长因子进行分选Treg细胞。具体操作步骤见。1．4混合淋巴细胞培养使用淋巴细胞分离液常规分离MS多发性硬化(multiplesclerosis，MS)是一种发生于中枢患者及对照新鲜外周血中单个核细胞，每10个细胞加入神经系统的炎性脱髓鞘疾病，致残率很高，严重影

3、响患者20L抗人CD4PerCP、CD25APCMcAb各20，送北京大的生存质量m。其发病机制迄今尚未完全明确，多认为由学医学部中心实验室进行流式分选CD4CD25-T细胞。将于基因和环境的相互作用有关。多个研究发现MS患者分选所获Treg(2x10个／孔)与自体CFSE标记的CD4外周血CD4CD25Treg的效应功能较正常对照下降。CD25一T细胞按1：1比例共培养，同时加入经钻。(30Gray)动物实验中，经静脉注射给予EAE鼠CD4CD25Treg可明照射的自体PBMClxl0个／孑L，加入含有10％FBS的RP

4、—显缓解其临床病情。获取足量功能改善的Treg并自体回MI1640培养液150IxL进行培养。病例组和对照组均分输无疑会为MS治疗提供一个安全有效新途径。为3个亚组：①阴性对照：CD4CD25一T细胞+PBMC+Treg；既往我们通过体外诱导的方法，以髓鞘碱性蛋白②MBP组：CD4CD25一T细胞+PBMc+Treg+MB5—99肽段；③(MBP)肽段作为抗原，以同种异体CD40配体激活的B阳性对照：CD4CD25一T细胞+PBMC+Treg+抗一CD3和细胞为APC，和患者的CD4CD25一细胞共培养，并以髓鞘碱抗一CD

5、28McAb，3d后收集细胞，取上清液用以检测上清性蛋白(MBP)85-99、可溶性4—1BBL、雷帕霉素共刺激10d，液中IL一10和TGF一131的表达。由于病例组和对照组各有在体外诱导出功能正常的Tregt，但其机制尚未明确。因1例在培养中出现污染，最终病例组及对照组均只得到4此本文检测了体外诱导的Treg和CD4CD25一T细胞共培养例的检测结果。的上清液中IL一10(白细胞介素一10)和TGF一131(转化生长因1．5ELISA法检测培养上清IL一10和TGF一131的表达使用子一B1)的表达，以期对Treg的功

6、能抑制机制作进一步的ELISA试剂盒检测检测培养上清里IL一10和TGF一131的表探讨。达，具体操作严格按照试剂盒步骤进行。所有标准品和样l对象与方法本均复空加样，取均值进行分析。根据标准品均值数值绘1．1病例收集设MS组(n=5)和健康对照组(n=5)，全部为制标准曲线，根据标准曲线计算各组样本浓度。北方汉族人，均经SSP—PCR方法进行HLA—DRB1基因分型1．6统计学方法数据先进行方差齐性检验，符合正态分后证实为DR2。MS人组标准：①患者知情同意；②所有布的数据分析分别采用单因素方差分析和T检验。检验MS患者符

7、合2005年McDonald年诊断标准，且均为病情水准0．05。稳定的复发一缓解型MS。排除标准：①入组前6个月内曾2结果接受免疫调节药物治疗；②合并有其他自身免疫性疾病。2．1培养上清中IL一10的含量根据标准品均数绘制标准曲线，如图1所示，计算得到标准曲线，y=38．01x一1．872。根据标准曲线计算样品浓度，MS组中各亚组IL一10的平均doi：10．3936／j．issn．1002-0152．2015．03．012☆国家自然科学基金(编号：81171123)浓度分别为：阴性对照组(1．58±0．09)pg／mL，

8、MBP组为北京大学人民医院神经内科(北京100044)(2．32+0．12)pg／mL，阳性对照组为(1．63-+0．08)pg／mL。健。通信作者(E—mail：gxg56@tom．COB)康对照组中各亚组IL一10的平均浓度分别为：阴性对照组北京大学人民医院中心实验室l82ChinJNervMent